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Efeito da edição gênica e modulação da expressão de MIR146B no câncer de tiroide.

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Autor(es):
Daniel Casartelli de Santa Inez
Número total de Autores: 1
Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
Imprenta: São Paulo.
Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI)
Data de defesa:
Membros da banca:
Edna Teruko Kimura; Vanessa Morais Freitas; Ileana Gabriela Sanchez de Rubio; Carolina Ferraz da Silva
Orientador: Edna Teruko Kimura; Cesar Seigi Fuziwara
Resumo

MicroRNAs (miRNAs) são pequenos RNAs não codificantes que regulam a expressão de mRNAs alvo e são comumente desregulados no câncer. No câncer de tireoide, miR-146b é o miRNA mais superexpresso, estando associado à oncogênese e agressividade tumoral, levando à características clínicas e patológicas de pior prognóstico. Desta forma, visamos compreender o papel de miR-146b em um modelo agressivo de câncer de tireoide usando a metodologia de edição genica CRISPR/Cas9n. A linhagem KTC2 (carcinoma anaplásico humano) que expressa um alto nível de miR-146b foi cotransfectada com plasmídeos pSp-Cas9n-miR-146b-guiaA-puromicina e pSp-Cas9n-miR-146b-guiaB-GFP, contendo RNAs guia projetados para flanquear a região do precursor de miR-146b, impedindo a formação do pré-miR. Após a transfecção, foram selecionados dois clones, KTC2-Cl1 e KTC2-Cl3, e uma linha celular controle, KTC2-CTR, cotransfectada com ambos os plasmídeos sem RNA guia. Após a seleção dos clones e confirmação da edição de MIR146B pelo sequenciamento da região alvo, a expressão de miR-146b foi analisada por qPCR a partir do RNA total extraído, e seguida de ensaios de contagem celular, viabilidade, migração, formação de colônias e xenotransplante em camundongos imunossuprimidos. As linhagens KTC2 Cl1 e Cl3 apresentaram diminuição na expressão de miR-146b em relação ao controle, apresentando também redução na proliferação, viabilidade celular, migração e formação de colônias. E ainda, no experimento de xenotransplante, não houve crescimento tumoral das células KTC2-Cl1, injetadas no flanco de camundongos nude. Dessa forma, a modulação da expressão de miR-146b por edição genica utilizando CRISPR/Cas9n mostrou-se eficiente e constitui uma ferramenta molecular para o entendimento do papel dos miRNAs no câncer de tireoide. (AU)

Processo FAPESP: 19/19865-8 - Efeito do silenciamento de miR-146b no câncer de tiroide
Beneficiário:Daniel Casartelli de Santa Inez
Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado