Texto completo
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| Autor(es): |
Daniel Casartelli de Santa Inez
Número total de Autores: 1
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| Tipo de documento: | Dissertação de Mestrado |
| Imprenta: | São Paulo. |
| Instituição: | Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI) |
| Data de defesa: | 2021-12-08 |
| Membros da banca: |
Edna Teruko Kimura;
Vanessa Morais Freitas;
Ileana Gabriela Sanchez de Rubio;
Carolina Ferraz da Silva
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| Orientador: | Edna Teruko Kimura; Cesar Seigi Fuziwara |
| Resumo | |
MicroRNAs (miRNAs) são pequenos RNAs não codificantes que regulam a expressão de mRNAs alvo e são comumente desregulados no câncer. No câncer de tireoide, miR-146b é o miRNA mais superexpresso, estando associado à oncogênese e agressividade tumoral, levando à características clínicas e patológicas de pior prognóstico. Desta forma, visamos compreender o papel de miR-146b em um modelo agressivo de câncer de tireoide usando a metodologia de edição genica CRISPR/Cas9n. A linhagem KTC2 (carcinoma anaplásico humano) que expressa um alto nível de miR-146b foi cotransfectada com plasmídeos pSp-Cas9n-miR-146b-guiaA-puromicina e pSp-Cas9n-miR-146b-guiaB-GFP, contendo RNAs guia projetados para flanquear a região do precursor de miR-146b, impedindo a formação do pré-miR. Após a transfecção, foram selecionados dois clones, KTC2-Cl1 e KTC2-Cl3, e uma linha celular controle, KTC2-CTR, cotransfectada com ambos os plasmídeos sem RNA guia. Após a seleção dos clones e confirmação da edição de MIR146B pelo sequenciamento da região alvo, a expressão de miR-146b foi analisada por qPCR a partir do RNA total extraído, e seguida de ensaios de contagem celular, viabilidade, migração, formação de colônias e xenotransplante em camundongos imunossuprimidos. As linhagens KTC2 Cl1 e Cl3 apresentaram diminuição na expressão de miR-146b em relação ao controle, apresentando também redução na proliferação, viabilidade celular, migração e formação de colônias. E ainda, no experimento de xenotransplante, não houve crescimento tumoral das células KTC2-Cl1, injetadas no flanco de camundongos nude. Dessa forma, a modulação da expressão de miR-146b por edição genica utilizando CRISPR/Cas9n mostrou-se eficiente e constitui uma ferramenta molecular para o entendimento do papel dos miRNAs no câncer de tireoide. (AU) | |
| Processo FAPESP: | 19/19865-8 - Efeito do silenciamento de miR-146b no câncer de tiroide |
| Beneficiário: | Daniel Casartelli de Santa Inez |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Mestrado |