Estudo dos mecanismos de degradação do fator de transcrição 4 (TCF4), associado a síndromes do espectro autista e esquizofrenia

Autor(es)

Carolina Nunes Santo

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2023-07-27

Membros da banca

Fabio Papes; Guilherme Oliveira Barbosa; Janaína Sena de Souza

• Orientador: Mário Henrique Bengtson; Fabio Papes

Resumo

O Fator de Transcrição 4 (TCF4) é uma proteína pertencente a família basic helix- loop-helix altamente expressa durante o neurodesenvolvimento com importante papel na maturação de células progenitoras neurais, neurogênese e migração neuronal. Polimorfismos em TCF4 estão associados a inúmeros transtornos neuropsiquiátricos, incluindo transtorno bipolar, depressão, esquizofrenia e autismo. Além disso, a haploinsuficiência de TCF4 leva ao desenvolvimento da Síndrome de Pitt-Hopkins (PTHS), uma doença genética rara pertencente ao espectro autista caracterizada por deficiência intelectual, atraso motor severo, disfunção do sistema nervoso entérico e dismorfismos faciais específicos. O escasso conhecimento acerca da biologia básica de TCF4 somado a falta de compreensão dos mecanismos moleculares da doença colaboram para a inexistência de terapias específicas até o momento. Uma vez que mutações em TCF4 de portadores da PTHS são mutações autossômicas de perda-de-função, o aumento da quantidade e/ou atividade de TCF4 nas células do sistema nervoso seria uma possível estratégia terapêutica para a correção ou atenuação dessa patologia. Sendo assim, a identificação de enzimas chaves da via de degradação proteica mediada por ubiquitina-proteassoma de TCF4 representa uma potencial avenida de identificação de novos alvos terapêuticos para a PTHS e o futuro desenvolvimento de terapias específicas. Como as enzimas E3 ligases ditam a especificidade do reconhecimento da proteína-alvo e sua marcação para a degradação pela via ubiquitina-proteassoma, elaboramos uma estratégia onde utilizamos uma biblioteca comercial de CRISPR knockout contendo sgRNAs para todas as E3 ligases codificadas no genoma humano para infectar células neurais expressando de forma estável a enzima acessória Cas9 e repórters para quantificação de TCF4 detectáveis por citometria de fluxo, com o objetivo de identificar células com metabolismo alterado de TCF4 após CRISPR screening a partir da fluorescência do repórter e consequentemente, identificar a E3 ligase envolvida na degradação de TCF4 (AU)

• Processo FAPESP: 21/10189-0 - Estudo dos mecanismos de degradação do Fator de Transcrição 4 (TCF4), associado a síndromes do espectro autista e esquizofrenia
• Beneficiário: Carolina Nunes Santo
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado