Estabelecimento do cultivo in vitro de organoides endometrial bovinos para estudo da comunicação materna embrionária

Autor(es)

Thais Sayuri Imura Oshiro

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ/SBD)
• Data de defesa: 2024-07-30

Membros da banca

Flavio Vieira Meirelles; Mario Binelli; Marcia de Almeida Monteiro Melo Ferraz

• Orientador: Flavio Vieira Meirelles; Tiago Henrique Camara de Bem

Resumo

Em vacas, altas taxas de perdas embrionárias se tornam relevantes, com cerca de 10% devido a falhas na fertilização e 50% devido a falhas no desenvolvimento embrionário. Para entender melhor esses processos, utilizamos cultivo 3D para simular o ambiente endometrial in vivo. Nosso estudo desenvolve um ambiente in vitro usando esferoides de glândulas endometriais co-cultivados com células epiteliais e estromais (GES), investigando como essa comunicação afeta a interação com embriões bovinos. Hipotetizamos que esse modelo 3D mimetiza condições mais próximas do útero in vivo em bovinos. Dividimos o estudo em dois experimentos. No Experimento 1, avaliamos os efeitos morfológicos dos esferoides glandulares e GES sob diferentes concentrações de progesterona, de D2 a D9. Observamos uma variabilidade inicial no crescimento das glândulas endometriais, independentemente da exposição hormonal iniciada no D2. Os efeitos dos tratamentos hormonais (E2, P4, E2+P4) na altura e área dos esferoides no D9. Constatamos que, em ambos os grupos (glândulas isoladas e GES), os tratamentos com P4 e E2+P4 resultaram em áreas esféricas maiores em comparação ao controle. No Experimento 2, investigamos o efeito da combinação de E2+P4 no grupo Gland versus GES, introduzindo embriões no dia 7 do desenvolvimento e avaliando no dia 8 do cultivo. Focamos em 382 microRNAs (miRNAs), analisando seus perfis nos grupos Gland_CT, Gland_E2+P4, Gland_E2+P4_Emb, GES_CT, GES_E2+P4, e GES_Emb_E2+P4. Identificamos miRNAs exclusivos em cada grupo, com análises bioinformáticas prevendo a modulação de diversas vias biológicas. Destacamos que a via Axon Guidance foi comum a todos os grupos Gland, mostrando sua importância. No grupo GES, identificamos 12 miRNAs exclusivos em GES_CT, 2 em GES_E2+P4, e 12 em GES_Emb_E2+P4, modulando diferentes vias como sinalização de oxitocina, e sinalização de mTOR, entre outras. A via “Pathway in Cancer” foi comum entre os subgrupos, associada a múltiplas funções biológicas. Esses resultados destacam a complexidade das interações regulatórias nos modelos de cultura 3D para estudo da comunicação materno-embrionária em bovinos. O uso de glândulas cocultivadas com células epiteliais e estromais para gerar um ambiente que mimetize o endométrio bovino in vitro para estudar a comunicação materno-embrionária apresentou-se como um modelo que corresponde às expectativas do estudo. (AU)

• Processo FAPESP: 21/13948-9 - Estabelecimento do cultivo in vitro de organoides endometriais bovinos para estudo da comunicação materna/embrionária.
• Beneficiário: Thais Sayuri Imura Oshiro
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado