Caracterização farmacologica do relaxamento de corpo cavernoso de coelho induzido pelo veneno de Tityus serrulatus

Autor(es)

Cleber Evandro Teixeira

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas
• Data de defesa: 1997-00-00

Membros da banca

Edson Antunes

• Orientador: Edson Antunes

Resumo

Tityus serrulatus é o escorpião mais perigoso da subfamília Tityinae no Brasil devido à alta I toxicidade de seu veneno e sua vasta distribuição nos centros urbanos da região sudeste do país. As manifestações clínicas mais importantes do envenenamento humano pelo veneno de Tityus serrulatus são dor local intensa acompanhada de queimação no local da picada podendo durar de poucos minutos a várias horas. Estas manifestações podem ser acompanhadas por disfunções autonômicas como vômitos profusos, taquicardia, alterações pupilares, sialorréia, taquipnéia, salivação, distúrbios da pressão arterial, tremores, etc. O veneno de Tityus serrulatus atua sobre as terminações nervosas do sistema nervoso autônomo estimulando a liberação de acetilcolina ou catecolaminas de diferentes órgãos e tecidos. Os tecidos eréteis de diferentes espécies animais são inervados por fibras nervosas excitatórias adrenérgicas, inibitórias colinérgicas e inibitórias não-adrenérgicas não-colinérgicas (NANC) que, por sua vez, desempenha papel importante nos mecanismos neurais envolvidos na ereção peniana através da liberação de óxido nítrico (NO). Assim, as fontes potenciais de produção de NO em corpo cavernoso de coelho são os nervos NANC bem como o endotélio que reveste a rede de capilares sinusóides presentes no tecido cavernoso. Devido à estimulação NANC causar. O relaxamento do corpo cavernoso, investigamos os efeitos do venepo de Tityus serrulatus no corpo cavernoso de coelho. Os efeitos do veneno do escorpião Tityus serrulatus e suas frações no corpo cavernoso de coelho isolado foram investigados através de ensaios biológicos em cascata. Os tecidos foram continuamente infundidos com indometamicina ( 5,6 µM) para inibir a geração de produtos da ciclooxigenase. O veneno bruto de Tityus serrulatus (400 mg) foi purificado em coluna CM- celulose-52. Veneno de Tityus serrulatus ( 3-100 µg), acetilcolina(Ach; 0,3 - 30 nmol), e gliceril trinitrato(GNT; 0,5 - 10 nmol) relaxaram as preparações pré- contraídas pela noradrenalina(3 µM) de modo dose-dependente. Os inibidores não-específicos da NO sintase (NOS) Nw?nitro-L-arginina metil éster (LNAME; 10 µM), Nw-nitro - monometil - L - arginine (L-NMMA; 10 µM) e NG-iminoetil - L -ornitina (L - NIO; 30 µM) aumentaram o tonus dos tecidos e inibiram os relaxamentos induzidos por ACh e pelo veneno de Tityus serrulatus sem afetar aqueles induzidos pelo GTN. O efeito inibitório inibitório foi revertido pela infusão de L - arginina (300 µM), mas não D-arginina (300 µM). O inibidor da NOS neuronaI1-(2-trifluorometilfenil) imidazol (TRIM, 100 µM) não afetou o tonus nem os relaxamentos induzidos por ACh, bradicinina (Bk), veneno de Tityus serrulatus e GTN. O TRIM foi aproximadamente 1000 vezes menos potente que o L-NAME em inibir a NOS cerebelar de coelho in vitro, cuja atividade é medida pela conversão de [3H]-L-arginina para [3H]-L-citrulina. O inibidor seletivo de guanilato ciclase solúvel H-[1,2,4] oxadiazolo [4,3,-alquinoxalín-1 ona] (ODQ; 30 µM) também aumentou o tonus basal dos tecidos e aboliu os relaxamentos induzidos pelos agonistas mencionados acima. O azul de metileno (30 µM) também inibiu os relaxamentos induzidos pelo veneno, porém, ao contrário do ODQ, a inibição foi irreversível. O inibidor de proteases aprotinína (TrasylolÒ; 10 µg.ml-1), o antagonista de receptores muscarínicos atropina (1µM) e o antagonista de receptores B2 Hoe 140 (D-Arg-[Hyp3,Thi5,D-Tic7,Oic8]-BK; 50 nM) não afetaram os relaxamentos de RbCC induzidos pelo veneno de Tityus serrulatus. Bloqueadores de canais de K+ como a glibenclamida (10µM), apamina (0.1 µM), charibdotoxina (0.1 µM) e tetraetilamônio (10 µM) também não afetaram os relaxamentos induzidos pelo veneno. Capsaicina (3 e 10 nmol) relaxou os tecidos de maneira dose-dependente e não taquifilática. O vermelho de rutênio (30 µM), inibidor das respostas induzidas pela capsaicina, reduziu marcadamente os relaxamentos de RbCC causados pela capsaicina, mas não afetou aqueles induzidosos pelo veneno. L-NAME (10 11M) não apresentou efeito sobre os relaxamentos induzidos pela capsaicina. Por outro lado, o bloqueador de canais de sódio tetrodotoxina (TTX; 1 µM) aboliu os relaxamentos de RbCC induzidos pelo veneno de Tityus serrulatus sem afetaram os induzidos por capsaicina, ACh e GTN. A TTX (1µM) também reverteu prontamente a resposta do veneno quando infundido durante a fase de relaxamento. Das treze frações obtidas do veneno bruto de Tityus serrulatus, apenas as frações X, XI e XII causaram relaxamento de RbCC de modo dose-dependente, cujo efeito foi marcadamente 'inibido na presença de L-NAME (10 µM) ou tetrodotoxina (1µM). Nós propomos, portanto que o veneno de Tityus serrulatus atua seletivamente sobre as fibras NANC, possivelmente nitrérgicas, e que o NO gerado no nervo se difunde através dos terminais relaxando o músculo liso vascular adjacente. Além disso, a NOS neuronal (bNOS) já foi detectada no pênis humano e de rato usando-se anticorpos NOS específicos e imunohistoquímica. A descoberta de que o TRIM, um inibidor seletivo para a bNOS em camundongos, não afetou a liberação de NO induzida pelo veneno de Tityus serrulatus, pode, refletir sua potência reduzida sobre a enzima do coelho (AU)

• Processo FAPESP: 95/02183-5 - Caracterizacao farmacologica do veneno de tityus serrulatus em corpo cavernoso isolado de coelho: ensaio de diferentes inibidores da oxido nitrico sintase.
• Beneficiário: Cleber Evandro Teixeira
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado