Produção, purificação, caracterização bioquimica e aplicações de lipase de geotrichum sp

Autor(es)

Gabriela Alves Macedo

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Engenharia de Alimentos
• Data de defesa: 1995-05-19

Membros da banca

Glaucia Maria Pastore; Jose Luiz Pereira; Geraldo Lippel Sant'Anna Junior

• Orientador: Glaucia Maria Pastore

Resumo

Setecentas linhagens de leveduras foram isoladas de amostras de solo, frutas, água, resíduos industriais e testadas quanto à capacidade de hidrolisar glicerídeos através da produção de lipase extracelular. Destas linhagens, cinco foram pré selecionadas como produtoras de lipase. Foi encontrada uma linhagem identificada como Geotrichum sp que apresentou alta produção de lipase em meio de cultivo composto por 1.5 % de farinha de soja desengordurada, 1% de farinha de trigo, 3% de extrato de levedura, 0.2 % NH4NO3, quando incubada a 30 °C por 48 horas com agitação de 100 rpm. A lipase de Geotrichum sp hidrolisa preferencialmente ésteres de ácidos graxos de cadeia longa insaturada e não tem afinidade pelo substrato p-nitrofenil laurato. A lipase de Geotrichum sp foi purificada 16.5 vezes através de fracionamento com sulfato de amónio e Cromatografia em coluna de DEAE-Sephadex A-50. A enzima purificada foi caracterizada bioquimicamente verificando-se que possui duas subunidades de peso molecular estimado em 52000 e 57000, através de eletroforese vertical em gel SDS- poliacrilamida. A lipase de Geotrichum sp apresentou atividade ótima na faixa de pH 5 a 8 a 45°C. A atividade enzimática foi acrescida em 45% na presença de 1 mM MgS04 no sistema de reação. A enzima não sofreu ação inibitória na presença de p-cloromercuribenzoato quando pura. A esterificação enzimática de ácido graxo e glicerol pela lipase de Geotrichum sp foi examinada e verificou-se que a enzima catalisou a reação de esterificação de ácido oléico em glicerol, com incorporação de 63% do ácido oléico após 2 horas de reação a 40°C (AU)

• Processo FAPESP: 93/03932-6 - Producao, purificacao e caracterizacao bioquimica de lipase microbiana.
• Beneficiário: Gabriela Alves Macedo
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado