Expressão do receptor sensor de calcio com mutações e deleção no dominio extracelular

Autor(es)

Talita Casagrande Esteves

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas
• Data de defesa: 2004-06-12

Membros da banca

Marcos Tadeu Nolasco; Omar Magid Hauache

• Orientador: Lilia Freire Rodrigues de Souza Li

Resumo

o receptor sensor de cálcio (CASR) é membro da família III dos receptores que acoplam à proteína G e é de fundamental importância no processo da homeostase do cálcio. O domínio extracelular (ECD) do receptor é o principal sítio de ligação do Ca/+ e a maioria das mutações naturais que ocorrem nesse domínio afeta somente a afinidade do receptor pelo Cao2+.~AJgumasmutações no ECD podem causar uma alteração mais grosseira na estrutura do receptor, com conseqüente redução da sua expressão na superficie celular. O objetivo desta tese foi investigar o grau de expressão do CASR com mutações no ECD, incluindo alterações na polaridade ou no caráter ácido/base, em locais onde mutações ativadoras (ADH) ou inativadoras (FHH/NSHPT) já foram descritas. Além disso, também deletamos a região entre os aminoácidos 139 e 167 do ECD por ser uma região altamente hidrofóbica e cuja importância ainda não foi investigada. A técnica de Westem blotting nos permitiu verificar a expressão de todos os receptores mutados transfectados em células HEK-293. Através da densitometria das bandas de 140 e 160 kDa e a análise estatística do valores obtidos de três experimentos separados, verificamos uma expressão similar ao CASR nativo dos receptores mutados nas posições A116T, N118S, E127K, F128Y, T138K e Ll139-167. O receptor com a mutação P55S apresentou uma drástica redução na expressão das formas diméricas e oligoméricas (-220 kDa) em relação ao CASR nativo. Assim, podemos concluir que a expressão do CASR pode ser afetada de acordo com alterações das características dos aminoácidos nativos (polaridade, caráter ácido/base) e a mudança no padrão de expressão é dependente da posição do aminoácido mutado. A posição 55 demonstrou ser crítica para a expressão das formas diméricas do receptor, enquanto que a região hidrofóbica entre os aminoácidos 139 e 167 não é importante para a expressão nem para a formação de dímeros (AU)

• Processo FAPESP: 02/06217-7 - Investigacao do grau de expressao do receptor sensor de calcio com mutacoes e delecao no dominio extracelular.
• Beneficiário: Talita Casagrande Esteves
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado