Desenvolvimento e regulação do sistema NADPH oxidase na linhagem eosinofilia humana

Autor(es)

Juan Alvaro Lopez Quintero

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas
• Data de defesa: 2004-08-20

Membros da banca

Antonio Condino Neto; Lourdes Isaac; Heloisa de Araujo Ferreira; Edson Antunes

• Orientador: Antonio Condino Neto

Resumo

objetivo geral deste projeto foi investigar o desenvolvimento a reguJação do sistema NADPH oxidase na linhagem eosinofilica humana Nos concentramos nos genes CYBB que codifica a gp91-phox, componente principal do heterodímero citocromo b e no gene NCF-I que codifica a p47-phox. A expressão destes, e de outros genes estreitamente relacionados, é reguJada segundo a 1àsede diferenciação celular, sendo específica de células mielóides. Nosso estudo baseou-se em dois modelos experimentais. O primen-o desenvolvido a partir de leucócitos derivados de sangue de cordão umbilical, cuhivados com citocinas que promovem o crescimento e a diferenciação de eosinófilos, especificamente interleucina-3 (IL-3) e interleucina-5 (IL-5) e o segundo, desenvolvido a partir do clone 15 de células da linhagem HL-60, cultivado previamente em condições alcaJina.c;e posteriormente estimulado com ácido butírico. Em paralelo, lItili7amos os mesmos sistemas de diferenciação de eosinófilos, com citocinas que influenciam a função fagocítica, especificamente interferon-gama (IFN-y) e :fàtorde necrose tumoral-alfa (TNF-a). Também estud~mos o efeito dos glicocorticóides, em particuJar a dexametasona sobre a atividade oxidase de células HL-60 clone 15 diferenciadas com citocinas. Examinamos a atividade do sistema NADPH oxidase (por meio da redução do citocromo c especificamente inibida pela superóxido dismutase) e a expressão dos genes que codificam os componentes do sistema NADPH oxidase gp91-phox e p47-phox. Nossos resultados mostraram que as células HL-60 clone 15 se diferenciam numa linhagem eosinofilica quando tratadas com ácido butirico 0,5 mM, expressando um fenótipo eosinófilico maduro, com capacidade para liberar superóxido em quantidades relevantes. Também demonstramos que a cuJtura dessas células com IFN-y e TNF-a é suficiente para induzir sua diferenciação eosinofilica, além de expressar transcritos para os componentes gp91-phox e p47-phox do sistema NADPH oxidase. Verificamos que o ácido butírico, IFN-y e TNF-a. juntos tem a capacidade de aumentar a indução do sistema NADPH oxidase, sugerindo que podem utilizar vias comuns ou distintas para estimuJar o sistema NAPDH oxidase, o qual está relacionado ao estágio de desenvolvimento da diferenciação eosinofilica. Por outro lado, observamos que a dexametasona inibe tanto a atividade NADPHoxidasecomo a expressão do enegp91-phoxquandoadministradaantes,masnão apósa diferenciaçãodas céluJaslllr6O clone 15 com IFN-y e TNF-a. Em relação aos leucócitos derivados do sangue de cordão umbilical cuhivados com IL-3 e IL-5, demonstramos que se diferenciam e demonstram características morfológicas similares a eosinófilos maduros, além de apresentar um incremento significativo na liberação de superóxido e expressão gêniea de gp91-phox no dia 28 de cultura. Os estudos pretendem contribuir para o avanço do conhecimento sobre os mecanismos que reguJam o sistema NADPH oxidase fagocítico humano, em específico na linhagem eosinofilica humana (AU)

• Processo FAPESP: 00/04880-5 - Desenvolvimento e regulação do sistema NADPH oxidase na linhagem eosinofílica humana.
• Beneficiário: Juan Alvaro López Quintero
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado