Análise da expressão de genes reguladores do ciclo celular e do gene TCR híbrido (cromossomo 7) induzida pela radiação ionizante em fibroblastos humanos

Resumo

A radiação ionizante altera a expressão gênica por induzir quebras e mutações no DNA, sendo que uma série de genes reguladores do ciclo celular estão envolvidos na resposta celular ao dano induzido. Outros tipos de alterações também afetam o controle do ciclo, como no caso de genes híbridos TCR (receptor de célula-T), que resultam de recombinação V(D)J interloci entre dois genes TCR diferentes, levando a anomalias do sistema linfóide. O objetivo do presente projeto é analisar a expressão gênica, a nível de mRNA, de genes envolvidos no controle do ciclo celular e também de um gene híbrido TCR/TCR; por meio de "northem" e "dot blot", sob diferentes condições experimentais. Os genes escolhidos para a análise são: p53, ATM, c-myc, c-jun, -ras, p16INK4a, gadd45 (genes controladores do ciclo celular) e o gene híbrido TCR/TCR (localizado no cromossomo 7). Serão utilizadas três linhagens celulares: AT 5BIVA (fibroblastos transformados por SV40 derivados de pacientes com a síndrome ataxia telangiectasia), MRC-5 (fibroblastos humanos normais, transformados por SV40) e VH16 (fibroblastos humanos normais e primários). As culturas serão submetidas a diferentes protocolos de irradiação (gama, Cobalto 60) e a análise de expressão gênica será feita por "northern" e "dot blot". Os padrões de hibridação serão avaliados pela leitura de fósforo radioativo incorporado (aparelho Ciclone (Packard). (AU)