Estudo do desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais de fetos bovinos da raça Nelore (Bos taurus indicus)

Resumo

Ovários de fetos bovinos da raça Nelore serão colhidos em abatedouros e lavados em PBS, a 35ºC. Em meio de transporte a-MEM com antibióticos, a 35ºC, serão levados ao laboratório. O isolamento dos folículos será baseado nos estudos de FIGUEIREDO et al, (1993), com o uso de um procedimento mecânico simples de isolamento, sem enzimas. O cultivo in vitro dos folículos será individual, em gotas de 80 microlitros de meio, dispostas sobre uma fina camada de colágeno tipo I. O meio de cultivo utilizado será o a-MEM base adicionado de Bicarbonato de Sódio e BSA, acrescido ainda de 7,5% de soro fetal bovino (SFB) ou de um suplemento definido livre de soro (KnockoutTMSR) e 1,5 ng/ml de FSH ovino. Deverá ser testado ainda um sistema de co-cultivo com monocamada de fibroblasto primário de feto bovino. A melhor condição de cultivo será determinada através da avaliação morfológica dos folículos em desenvolvimento. A expressão para os dois tipos de Conexinas (43 e 37) presentes no folículo no estádio secundário será testada e quantificada logo após o isolamento e naqueles cultivados por até 10 dias através de Imuno-histoquímica com marcação dupla. Os resultados esperados estão relacionados à determinação dos efeitos do SFB ou KnockoutTMSR, bem como do co-cultivo com fibroblastos, sobre o protocolo de cultivo in vitro testado. Objetivamos ainda, comparar a expressão da Conexina-37 e Conexina-43 antes e após um período de cultivo para quantificação de sua eficiência. (AU)