Desconstrução molecular do módulo de controle do ciclo celular em células adrenocorticais y1 de camundongo

Resumo

Nosso laboratório vem, há décadas (ARMELIN, 1975), trabalhando na definição de mecanismos moleculares envolvidos no controle do ciclo celular, recentemente dando ênfase à linhagem Y1 de células adrenocorticais de camundongo (LOTFI et al, 2000). Os resultados que obtivemos nos últimos 4 anos (LEPIQUE et al, 2000; LOTFI; ARMELIN, 2001; FORTI et al, 2002; SCHWINDT et al, 2003; ROCHA et al, 2003) nos permitiram elaborar um módulo de rede de sinalização que integra sinais iniciados nos receptores transmembranares de FGF2 (Fibroblast Growth Factor 2), ACTH (Hormônio Adrenocorticotrópico) e AVP (Arginina-Vasopressina). FGF2 é um forte mitógeno para as células Y1, enquanto ACTH e AVP são antagonistas da ação mitogênica de FGF2. Adotamos a tática experimental de estudar as interações de FGF2 com ACTH ou A VP com o objetivo de encontrar vias moleculares de sinalização que integrassem os sinais oriundos dos respectivos receptores e explicassem o antagonismo entre esses hormônios. O racional dessa abordagem envolvia a premissa provável de que esse objetivo levaria a reações importantes do módulo de controle da transição GO->G1->S do ciclo celular das células Y1. De fato, essa premissa se realizou e os resultados experimentais obtidos levaram ao cerne do módulo de controle procurado. Neste momento, resultados não publicados e observações preliminares nos permitem propor um módulo ampliado da via mitogênica disparada pelos receptores de FGF2, que regula a transição GO->G1->S do ciclo celular das células Y1. Este módulo de rede de sinalização inclui hipóteses cuja validação experimental é a meta deste projeto temático. O plano experimental envolve: a) aplicação da tecnologia convencional do DNA recombinante a cultura de células de camundongo (clonagem e sequenciamento de genes e ESTs, construção de vetores de expressão, transfecções transientes e permanentes, etc.); b) bloqueio funcional de genes/proteínas por interferência de RNA (RNAi); c) análise de expressão gênica por "microarrays" de cDNA e d) análise de complexos protéicos por "duplo híbrido em levedura" ou isolamento por afinidade, resolução em SDS-PAGE seguida de espectroscopia de massa. (AU)