Estudo de aspectos estruturais da cromatina durante a ocorrência de pufes em Rhynchosciara americana

Resumo

Visa-se estudar a organização funcional da cromatina em regiões de amplificação gênica de cromossomos politênicos de Rhynchosciara americana, pela análise da possível participação de determinadas proteínas nos processos de amplificação e de transcrição destes pufes. As proteínas candidatas foram selecionadas em um banco de cDNA seqüenciado em nosso laboratório. Este banco foi construído a partir de um tecido larval (glândula salivar) no momento em que se inicia o último ciclo de politenia, fase que compreende o fenômeno de amplificação gênica. Simultaneamente propõe-se a implantação no laboratório de técnicas de silenciamento gênico (RNAi e oligos antisense morfolínicos), visto que até hoje não se estabeleceu linhagem estável em laboratório deste díptero, o que impede análises genéticas convencionais. Dentre os mensageiros selecionados para as análises iniciais do envolvimento na organização da estrutura dos cromossomos politênicos estão Histona H3. 3 e HMG-D. A análise das alterações fenotípicas em condições de silenciamento gênico será realizada por reconstruções 3D de secções óticas obtidas ao microscópio confocal. Pela primeira vez estudos são propostos sobre aspectos estruturais dos pufes em Rhynchosciara, visto que agora existe uma coleção de genes interessantes do próprio sistema servindo de ponto de partida e condições técnicas instaladas. (AU)