Detecção do genoma do vírus rábico, pela técnica de RT-PCR, em cérebro de diferentes espécies animais, conservados em temperatura de congelamento por longo período de tempo

Resumo

A técnica de RT-PCR, utilizada para a detecção do genoma viral em amostras positivas para raiva tem se mostrado altamente sensível, mesmo em amostras em estado adiantado de putrefação. Para o estudo genético de isolados do vírus rábico, é imprescindível que o genoma viral seja obtido da amostra e amplificado pela técnica de RT-PCR para posterior sequenciamento e análise filogenética. Este projeto tem o objetivo de detectar o genoma viral em amostras de cérebro de diferentes espécies de animais, positivos para raiva, no período de 1993 a 2003, armazenadas em temperatura de -20° e - 70°C. Serão utilizadas amostras de campo selecionadas a partir de um banco de 350 amostras diagnosticadas como positivas pelas provas de imunofluorescência direta e/ou prova de inoculação em camundongos, pelo Laboratório de Raiva da UNESP de Araçatuba. O RNA viral será extraído por meio de Trizol e clorofórmio. Para a obtenção e amplificação do cDNA viral serão utilizados os primers 10g e 304, estabelecidos pelo CDC-Atlanta/USA. Os fragmentos obtidos serão visualizados por meio de eletroforese em gel de agarose. Este projeto faz parte de um outro mais amplo, de estudo antigénico e genético de isolados do vírus rábico na região de Araçatuba, no período de 1993 a 2003, que está sendo iniciado com auxílio à pesquisa da FAPESP. (AU)