Desenvolvimento de um sistema de expressão e excreção de proteínas heterólogas na levedura Kluyveromyces marxianus

Resumo

O objetivo deste projeto de pesquisa é a de desenvolver um sistema eficiente de expressão de proteínas heterólogas na levedura Kluyveromyces marxianus. Para tal, haverá três etapas principais. Na primeira, selecionar-se-ão, dentre algumas linhagens de K. marxianus, duas que apresentem maior produção de inulinase extracelular, como forma de avaliação da capacidade de expressar e secretar proteínas heterólogas. Na segunda etapa, ocorrerá a construção do sistema genético de expressão, inserção do DNA plasmidial na levedura e medição da expressão da proteína heteróloga. As proteínas a serem testadas serão a enzima glicose oxidase (GOD) de Aspergillus niger e a proteína humana interferon alfa-2a. Na última etapa, serão realizados estudos em biorreator para que seja estudada a produção dessas proteínas em um sistema que simule a larga escala e também será medido o padrão de glicosilação dos peptídeos para se verificar como é o padrão de glicosilação em Kluyveromyces marxianus e como isto se compara com outras leveduras. (AU)