Caracterizacao molecular de cianobacterias brasileiras e selecao de linhagens produtoras de peptideos nao ribossomicos.

Resumo

Este projeto de pesquisa tem como objetivo caracterizar molecularmente linhagens de cianobactérias isoladas de regiões brasileiras por meio do seqüenciamento de uma região do operon da ficocianina a qual tem sido utilizada para diferenciar esses organismos ao nível de linhagens. As seqüências obtidas serão comparadas pela análise BLAST (NCBI) e a distância evolutiva entre as linhagens seqüenciadas serão analisadas por meio da construção de árvore filogenética. No mínimo 50 linhagens de cianobactérias deverão ser caracterizadas. Por meio da amplificação por PCR de seqüências gênicas das enzimas sintetase de peptídeo não-ribossômico (NRPS), sintase de policetônico (PKS) e sistemas híbridos de NRPS/PKS espera-se identificar entre as linhagens caracterizadas molecularmente àquelas potencialmente produtoras de compostos naturais bioquimicamente ativos. Essas enzimas são conhecidas por estarem envolvidas na biossíntese de toxinas e antibióticos. A detecção desses genes de peptídeos não ribossômicos será realizada utilizando oligonucleotídeos iniciadores degenerados tendo como alvo seqüências conservadas das enzimas NRPS, PKS e híbridos NRPS/PKS. Os produtos de PCR obtidos para essas enzimas deverão ser seqüenciados. Essas seqüências também serão comparadas pela análise BLAST e suas relações evolutivas verificadas pela construção de árvore filogenética. Metabólitos produzidos pelas linhagens que apresentarem genes dessas enzimas serão extraídos utilizando vários solventes. Os constituintes químicos dos extratos celulares obtidos serão analisados por TLC (Thin Layer Chromatography), HPLC (High Performance Liquid Chromatography) e Q-TOF-MS (Quadrupole Time-of-Flight Mass Spectrometry). A atividade inibitória desses compostos químicos será testada contra bactérias e fungos. (AU)