Caracterização molecular de cianobactérias isoladas de manguezais do Estado de São Paulo e distribuição de cianopeptídeos

Resumo

Este projeto de pesquisa tem como objetivo caracterizar molecularmente linhagens de cianobactérias isoladas de regiões de manguezais do Estado de São Paulo por meio do sequenciamento do gene de rRNA 16S, o qual tem sido utilizado para diferenciar geneticamente os microrganismos pertencentes ao domínio Bacteria. As seqüências obtidas serão comparadas pela análise BLAST (NCBI) e a distância evolutiva entre os nucleotídeos das linhagens sequenciadas serão analisadas por meio da construção de árvore filogenética. No mínimo cinquenta linhagens de cianobactérias deverão ser caracterizadas. Por meio da amplificação por PCR de seqüências gênicas das enzimas sintetase de peptídeo não-ribossômico (NRPS) e sintase de policetídeo (PKS) espera-se identificar entre as linhagens caracterizadas molecularmente àquelas potencialmente produtoras de compostos naturais bioquimicamente ativos (cianopeptídeos). Essas enzimas são conhecidas por estarem envolvidas na biossíntese de toxinas e antibióticos. A detecção desses genes de peptídeos não ribossômicos será realizada utilizando oligonucleotídeos iniciadores degenerados tendo como alvo seqüências conservadas das enzimas NRPS e PKS. Os produtos de PCR obtidos para essas enzimas deverão ser sequenciados. Essas seqüências também serão comparadas pela análise BLAST e suas relações evolutivas verificadas pela construção de árvore filogenética. Os cianopeptídeos produzidos pelas linhagens que apresentarem genes de NRPS e PKS serão extraídos utilizando vários solventes. Os constituintes químicos dos extratos celulares obtidos serão analisados por Q-TOF-MS (Quadrupole Time-of-Flight Mass Spectrometry) e HPLC (High Performance Liquid Chromatography). A atividade inibitória desses compostos químicos será testada contra bactérias e fungos.