Producao e caracterizacao de mutantes termoestaveis de endoxilanase recombinante de bacillus subtilis 1 a 1.

Resumo

As Xilanases hidrolisam randomicamente as ligações b-1,4 glicosídicas de b-1,4 xilanos, produzindo xilo-oligômeros de diferentes tamanhos, e são de interesse das indústrias que usam materiais lignino-celulósicosa. As indústrias de papel e celulose como exemplo são necessários dois processos para a obtenção de uma polpa pura: um cozimento inicial e um branqueamento da polpa, neste último utiliza-se temperatura elevada, de forma que a enzima deve ser tolerante. O uso de xilanases termoestáveis por um período prolongado em altas temperaturas pode melhorar a viabilidade técnica e econômica do processo por se adequar à aplicação nas indústrias de papel e celulose. A endoxilanase A da família G/11 do Bacillus subtilis é atualmente usada como modelo em nosso laboratório para estudar as bases moleculares que podem gerar a termoestabilidade desta enzima. O gene xylA está sendo clonado no vetor pT7T3, o qual, foi usado para transformar e expressar a xilanase de B. Subtilis, na linhagem de E.coli DH5a. A partir de técnicas de biologia molecular e evolução molecular "in vitro" foram isoladas 13 mutantes pontuais desta enzima termoestáveis que serão purificados e caracterizados bioquimicamente e biofisicamente usando metodologia já desenvolvida para endo-xilanase nativa do Bacillus subtilis 1A1. Como parte da caracterização dos mutantes, o projeto atualmente tem como objetivo a padronização em laboratório dos testes de viscosidade e determinação dos valores Kappa para a atividade destes mutantes sobre polpa de celulose. (AU)