Sistema de sinalização RhoA/Rho-cinase no músculo liso vascular de camundongos com hipertensão induzida por angiotensina II: interação com espécies reativas de oxigênio, interleucina-6 (IL-6) e via de sinalização JAK/STAT

Resumo

Sistema de sinalização RhoA/Rho-cinase no músculo liso vascular de camundongos com hipertensão induzida por angiotensina II: interação com espécies reativas de oxigênio, interleucina-6 (IL-6) e via de sinalização JAK/STAT. Os mecanismos responsáveis pelo aumento da resistência vascular periférica e alterações na reatividade vascular na hipertensão arterial são complexos. Vários pesquisadores têm direcionado sua atenção para a possibilidade do aumento da resistência periférica ser causado por alterações que tornam as células de músculo liso vascular mais sensíveis a estímulos fisiológicos ou normais. Observações experimentais recentes (1-4) indicam que o aumento de sensibilidade vascular reflete, pelo menos em parte, alterações na regulação da fosforilação da cadeia leve de miosina (MLC) pelo sistema RhoA/Rho-cinase (sensibilização ao cálcio). Neste sistema de transdução de sinais, a Rho-cinase, após ativação pela RhoA, fosforila a fosfatase da MLC (também conhecida como miosina fosfatase) para inibir sua atividade. Isto resulta na manutenção da fosforilação da MLC, o que promove interação entre actina e miosina, gerando contração.Neste projeto pretendemos investigar o sistema de sinalização RhoA/Rho-cinase no músculo liso vascular de camundongos hipertensos. Nossa hipótese de trabalho é que o aumento de reatividade vascular na hipertensão induzida pela infusão de Angiotensina II (Ang II) ocorre por dois mecanismos que aumentam a atividade funcional do sistema RhoA/Rho-cinase: 1) durante a fase inicial de elevação da pressão arterial, a Ang II estimula a produção de superóxido, o que leva à transativação do receptor para fator de crescimento epidermal (EGFR) e, subseqüentemente, à estimulação do sistema RhoA/Rho-cinase para causar vasoconstrição; e 2) durante a fase estabelecida de elevação da pressão arterial, a Ang II aumenta a quantidade de interleucina-6 (IL-6) plasmática e tecidual, causando ativação de janus cinases (JAK) e de transdutores de sinal e ativadores de fatores de transcrição (STAT, signal transducers and activators of transcription factors), aumentando a expressão de componentes do sistema RhoA/Rho-cinase e, conseqüentemente, mantendo a vasoconstrição. Esta hipótese de trabalho será testada por meio de três objetivos específicos: #1: Testar a hipótese que durante a fase inicial de elevação da pressão arterial, na hipertensão induzida por Ang II, o octapeptídeo estimula a via de sinalização RhoA/Rho-cinase pela ativação do EGFR via formação de superóxido. Componentes da cascata RhoA/Rho-cinase serão quantificados em vasos sanguíneos de camundongos normotensos e hipertensos. Será realizada uma análise farmacológica da via de sinalização RhoA/Rho-cinase (respostas contráteis, sensibilização ao cálcio) em relação à geração de superóxido, induzida por Ang II, na estimulação do EGFR; #2: Testar a hipótese que durante a fase estabelecida da hipertensão induzida por Ang II, o octapeptídeo e a IL-6 aumentam a expressão de componentes da cascata RhoA/Rho-cinase pela ativação da via JAK/STAT. Componentes do sistema RhoA/Rho-cinase e via de sinalização JAK/STAT serão quantificados em camundongos selvagens e com ablação gênica de IL-6 durante a fase estabelecida da hipertensão induzida por Ang II. Será realizada uma análise farmacológica da via de sinalização RhoA/Rho-cinase (respostas contráteis, sensibilização ao cálcio) em relação à sinalização JAK/STAT induzida por Ang II; #3: Testar a hipótese que o aumento na sinalização do sistema RhoA/Rho-cinase não está relacionado ao aumento da pressão arterial per se na hipertensão induzida por Ang II. A influência da pressão arterial per se na hipertensão induzida por Ang II será analisada pela diminuição farmacológica da pressão arterial e também pela proteção de um leito vascular contra a sobrecarga hemodinâmica. (AU)