Caracterização de proteinases expressas pelo fungo causador da vassoura de bruxa, Crinipellis perniciosa

Resumo

A doença conhecida como vassoura-de-bruxa é a principal causadora de danos para economia cacaueira. O genoma do fungo-Crinipellis perniciosa, causador dessa doença, foi seqüenciado com o intuito de caracterizar a fisiologia deste patógeno e identificar possíveis alvos de drogas. Os dados desse projeto vêm sendo utilizados com sucesso na elucidação de rotas bioquímicas relacionadas com a patogenicidade do fungo. Proteinases e inibidores de proteinases vêm sendo diretamente relacionadas a mecanismos de fitopatogenicidade. Cremos que um estudo mais detalhado dessas famílias de proteínas em C. perniciosa pode nos ajudar a descobrir mecanismos de patogenicidade do fungo durante a infecção do cacaueiro. O projeto se resume na identificação de proteinases e inibidores de proteinases no banco de dados de seqüências de DNA de C. perniciosa. Alguns genes serão selecionados para experimentos de análise de expressão gênica, por Northern blot e Real Time-PCR e de funcionalidade com ensaios de superexpressão de proteínas. Através de técnicas de co-imunoprecipitação buscaremos alvos vegetais das proteínas do patógeno. Faremos uma análise de atividade proteolítica e anti-proteolitica in gel de proteínas secretadas pelo fungo. As proteínas identificadas por testes de atividade in gel e imunoprecipitação serão submetidas à espectrometria de massas para a identificação de seqüências. (AU)