Bases moleculares das propriedades cataliticas das enzimas.

Resumo

O objetivo geral deste projeto é identificar e analisar as bases moleculares da determinação da especificidade enzimática pelo substrato e da modulação da atividade catalítica das enzimas pelo pH. Serão usadas como modelos experimentais uma beta-glicosidase (Sfbgli50) e duas lisozimas (Lys1 e Lys2). A Sfbgli5O será submetida a mutagênese sítio-dirigida, expressa como proteína recombinante em bactérias e caracterizada em experimentos de cinética enzimática a fim de serem identificados resíduos do seu sítio ativo que interagem com o substrato e também de ser evidenciada uma interdependência entre estas interações. A Sfbgli50 também será submetida a mutagênese aleatória a fim de serem localizados resíduos envolvidos na modulação do seu pH ótimo. A estrutura cristalográfica de Lys1 e Lys2 serão determinadas a partir de dados de difração de raios-X (já coletados). A análise estrutural destas enzimas e sua comparação com outras lisozimas poderá revelar fatores envolvidos na determinação do pH ótimo ácido de Lys1 e Lys2. (AU)