Investigação da microbiota de canais radiculares infectados de dentes sintomáticos e assintomáticos por cultura e sequenciamento do gene 16S rRNA

Resumo

Os microrganismos representam importante papel no estabelecimento das alterações poupares e periapicais. Diferente dos métodos de identificação fenotípica, o seqüenciamento do 16S rDNA fornece identificação inquestionável até mesmo para bactérias que são raras. O objetivo do presente estudo é identificar bactérias cultiváveis isoladas de canais radiculares assintomáticos, portadores de lesões periapicais crônicas e canais infectados e sintomáticos no momento da coleta, utilizando métodos bioquímicos e também seqüenciamento do gene 16S rRNA. Serão selecionados 20 pacientes com dentes com necessidade de intervenção endodôntica, com presença de lesão periapical, 10 sintomáticos e 10 assintomáticos, usando pontas de papel estéreis, transporte em VMGAIII, diluídas, plaqueadas e incubadas em anaerobiose. Colônias microbianas serão isoladas, caracterizadas e identificadas por métodos bioquímicos padronizados. Reação de PCR será realizada para amplificar a região V6-V8 do gene 16S rRNA e então será realizado o seqüenciamento destas amostras. As seqüências do 16S rRNA serão editadas e alinhadas usando o BioEdit e ClustaIW.O BLASTn aigorithm será usado para comparar as seqüências de ácido nucléico contra uma seqüência de nucleotídeos do banco de dados do NCBI. Os dados coletados serão introduzidos numa planilha de cálculo e estatisticamente analisados usando SPSS for Windows. (AU)