Participacao da proteina cinase mtor (mammalian target of rapamycin) e do fator transcricional nf-kb na regulacao da expressao do glut4 em musculo soleo de ratos.

Resumo

É possível que a insulina seja um importante regulador da expressão do gene do GLUT4, entretanto, in vivo, as inúmeras alterações metabólico-hormonais que induz não permitiram, até o momento, que se defina claramente esse papel da insulina. O isolamento das variáveis metabólico-hormonais, in vitro, é um caminho para se buscar determinar os efeitos I diretos da insulina na regulação do gene do GLUT4. Sabendo que a insulina estimula a via mitogênica, na qual a proteína cinase mTOR (mammalian target of rapamycin) desempenha papel chave, e a partir de estudos anteriores evidenciando uma modulação do fator transcricional NF-kB (Nuclear Factor -kappa B), o objetivo desta pesquisa é investigar a participação da mTOR e do NF-kB na regulação da insulina sobre a expressão do GLUT4 em músculo sóleo de ratos, in vitro. Para isso, músculos sóleos de ratos serão incubados (60, 120 e 180 minutos) em tampão Krebs-Henseleit, suplementado ou não com glicose (5.6 mM), insulina regular (16.7 nM), wortmannin (inibidor da phosphatidylinositol-3 kinase, 1 uM) e rapamycin (inibidor da mTOR, 25 nM). Nestes tecidos será avaliado: o conteúdo de mRNA e proteína GLUT4 (Northern e Western), o conteúdo de mRNA do NF-KB (PCR), atividade de ligação de proteínas nucleares no sítio de ligação do NF-KB do promotor do GLUT4 (Electroforetic Mobility Shift Assay - EMSA), e a participação das isoformas de NF-KB p50 e ReIA (supershift). Espera-se determinar mecanismos específicos da insulina na regulação do GLUT4, o que deverá contribuir para estabelecer medidas de regulação da expressão desse gene. (AU)