Analise da regulacao do ph intracelular em celulas renais.

Resumo

O objetivo geral do projeto de pesquisa é investigar os mecanismos envolvidos com as vias de sinalização celular, responsáveis pela modulação da isoforma 1 humana do trocador Na+/H+ (hNHE1). Pretendemos avaliar a participação do complexo cálcio-calmudulina sabre a atividade do hNHE1.Com esta finalidade, serão utilizadas metodologias de fluorescência e biologia molecular, incluindo a expressão da forma selvagem do hNHE1 (Wild type) e mutantes desse transportador. Estes estudos serão realizados em células derivadas de fibroblastos do pulmão de hamster (PS120), onde serão investigados os mecanismos de ação do hormônio Angiotensina II (ANG II) na modulação do hNHE1 via cálcio-calmodulina. Pretendemos investigar também, a participação da glicose extracelular sobre os mecanismos de sinalização celular, envolvidos com a atividade do hNHE1 e se esses mecanismos estão acoplados à atividade da isoforma 2 do co-transportador Na+:glicose (SGLT2). Com esta finalidade, serão utilizadas metodologias de fluorescência e biologia molecular, para avaliar a expressão e atividade desses transportadores. Neste modelo, serão investigados tanto a recuperação do pH intracelular (pH;), como a expressão do SGLT2 e do hNHEI, na condição controle ou na vigência de diferentes concentrações de glicose e/ou florizina (inibidor do SGLT2), EIPA (inibidor do trocador Na+/H+), ouabaína (inibidor da Na+/K+-ATPase), H-89 (inibidor da PKA) ou GO 6976 (inibidor das PKCs alfa e beta). Para tal, estamos apresentando 2 subprojetos: 1) Expressão e função da isoforma 1 do trocador Na+/H+ humano (hNHE1), em células PS 120; 2) Efeito da glicose sobre a atividade do trocador Na+/H+ em células HEK-293. (AU)