Estudo dos efeitos da terapia fotodinâmica sobre streptococcus mutans

Resumo

Este estudo será dividido em quatro etapas distintas. Primeira etapa: culturas de S. mutans crescerão em infusão de cérebro-coração e posteriormente serão divididas em grupos expostos (teste) ou não expostos (controle) à terapia fotodinâmica. Esta fase determinará os protocolos de terapia fotodinâmica (concentrações do fotossensibilizador PHOTOGEM® e densidades de energia do diodo emissor de luz) que deverão ser utilizados na segunda e terceira etapas do estudo. Segunda etapa: blocos de dentina serão confeccionados a partir da porção coronária de incisivos inferiores bovinos e seguidamente inseridos em culturas bacterianas similares às da primeira etapa. Após 5, 10 e 15 dias da incubação, os blocos e os respectivos biofilmes dentários formados serão expostos ou não à terapia fotodinâmica. Posteriormente, os biofilmes dentários serão coletados para a realização da contagem do número de bactérias viáveis, enquanto os blocos de dentina serão submetidos à análise microrradiográfica, com o intuito de determinar os padrões de perda mineral do tecido dentinário (%vol µm), profundidade da lesão (µm) e conteúdo mineral da superfície e do corpo da lesão (%vol). Terceira etapa: blocos de dentina e os respectivos biofilmes formados serão submetidos, dependendo dos grupos a que pertencerem, a um total de 0, 1, 2 ou 3 sessões de terapia fotodinâmica, realizadas durante todo o período experimental. No máximo uma única sessão de terapia fotodinâmica poderá ser realizada em cada um dos três dias pré-determinados (5, 10 e 15 dias, contados a partir do início da incubação dos blocos em meios de cultura protegidos contra a luz). Após 20 dias do início da incubação, o número de bactérias viáveis aderidas sobre os espécimes e os padrões de perda mineral do tecido dentinário (%vol µm), profundidade da lesão (µm) e conteúdo mineral da superfície e corpo da lesão (%vol) serão determinados, como na etapa anterior. Quarta etapa: serão avaliados o potencial antimicrobiano e a capacidade da terapia fotodinâmica em promover estresse oxidativo aos S. mutans selvagens e S. mutans cujo gene VicK sofreu deleção. Após a promoção do estresse oxidativo, os dois tipos bacterianos serão cultivados e a porcentagem de microrganismos viáveis será determinada. Também, a expressão da proteína GFP será conhecida pela determinação da intensidade de fluorescência emitida pelas células bacterianas por um citômetro de fluxo. A análise estatística será conduzida após a prévia seleção dos testes estatísticos, baseada na normalidade e homogeneidade dos dados. O nível de significância adotado em todos os testes será de 5%.