Aplicação da técnica de espectrometria de massas para caracterização do lipidoma em oócitos e embriões bovinos

Resumo

Embriões bovinos produzidos por fertilização in vitro (FIV) possuem menor qualidade, menor viabilidade e maior criosensibilidade em relação aos embriões obtidos in vivo. Atualmente, o principal obstáculo para a expansão comercial da FIV no Brasil é a possibilidade de obtenção de taxas de prenhez satisfatórias a partir de embriões de raças zebuínas criopreservados. Estudos salientaram a influência dos lipídeos na fertilidade, no desenvolvimento embrionário e na criosensibilidade de embriões. O objetivo desse projeto é estabelecer o perfil das classes mais abundantes de lipídeos, ou seja, triglicerídeos (TAGs) e fosfolipídeos, em oócitos bovinos imaturos, maturados in vitro, embriões coletados in vivo e embriões produzidos por FIV com ou sem adição de ácido linoléico no meio de cultivo. Os oócitos e embriões coletados terão a zona pelúcida removida em pronase 0,5% e serão estocados em solução de metanol/água 1:1 (v/v) a -80ºC até a análise. Será utilizada a técnica de espectrometria de massas por ionização/dessorção de matriz assistida a laser - tempo de vôo (MALDI-TOF MS), com matriz ácido 2,5-di-hidroxibenzóico (DHB). A coleta de espectros de massas será realizada em equipamento MALDI-TOF (Micromass. Manchester, UK). Os espectros serão processados (MassLynx v.4.0 Waters, Manchester, UK) para caracterização dos lipídeos e análise quimiométrica (Pirouette 3.11, Infometrics Inc, EUA). A caracterização do lipidoma de oócitos e embriões, até então não relatada na literatura, pode se tornar uma importante ferramenta no desenvolvimento de estratégias de criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro. (AU)