Estudo da Reconstituição Hematopoética em Camundongos Irradiados após infusão de Células Tronco Imaturas da Polpa de Dente Humana

Resumo

A maioria das células dentro do sistema hematopoético são células maduras (diferenciadas), têm um restrito período de vida e precisam ser substituídas a partir de seus progenitores. O sistema hematopoético é derivado de Células Tronco Hematopoéticas e estas têm capacidade de proliferação e diferenciação, dando origem a todas as linhagens mielóide e linfóide. A ampla utilização do Transplante de Células Hematopoéticas no tratamento das doenças hematológicas, onco-hematológicas e imunológicas é resultante de mais de um século de pesquisas e as células hematopoéticas podem ser obtidas a partir da própria medula óssea, a partir do sangue periférico ou de um cordão umbilical. Estudos com camundongos NOD/SCID têm mostrado que o modelo de xenotransplante pode ser eficiente para avaliar o potencial de transplante de células tronco hematopoéticas isoladas da medula óssea, do sangue periférico ou do cordão umbilical. Em função dos dados obtidos durante o desenvolvimento do projeto de pos-doutorado, sendo a via intravenosa a melhor via de inoculação para as Células Tronco Imaturas da Polpa de Dente (CTIPD) humana e que por essa via houve o melhor enxerto da medula óssea de camundongos, pretendemos neste projeto verificar se elas são capazes de originar linhagens hematopoéticas em camundongos Balb/C e NOD/SCID irradiados. As CTIPD serão transformadas geneticamente com o gene GFP, o que vai permitir a sua identificação/rastreamento nos tecidos de camundongos. As células CTIPD-GFP serão inoculadas por via intravenosa nos animais e, a cada semana, o sangue periférico dos animais serão coletados para análise do hemograma, e um grupo deles serão sacrificados para verificar o enxerto das células nos órgãos hematopoéticos (baço, timo, medula óssea e linfonodo). Ainda, realizaremos a análise in vitro para verificarmos se as CTIPD resultam em resposta de células T, o que poderia resultar na Doença do enxerto contra o Hospedeiro. A presença de células humanas será comprovada por RT-PCR (Oct-3/4, GBA), por imunohistoquímica usando também o anticorpo Anti-CTPD, e citogenética pela análise por hibridação in situ fluorescente (FISH) com sondas específicas para cromossomos humanos.