Avaliação do perfil de segurança associado ao uso de vetores retroviral e lentiviral para terapia gênica no sistema hematopoiético

Resumo

Os vetores retrovirais (e em particular, os vetores derivados do vírus da leucemia murina de Moloney, MoMLV) estão entre os principais vetores utilizados em protocolos clínicos de terapia gênica, inclusive para o tratamento de doenças hematopoiéticas como SCID-X1. Embora o tratamento desta doença tenha sido bem sucedido, alguns pacientes apresentaram um quadro de leucemia atribuído à proliferação clonal em consequência de uma combinação de fatores, incluindo mutagênese insercional retroviral, possível vantagem proliferativa conferida pelo gene terapêutico e o fenótipo das células tratadas. Nos últimos anos, vetores derivados de lentivírus foram desenvolvidos para aplicação clínica, com a vantagem de que estes vetores possuem a capacidade de transduzir células pós-mitóticas e apresentam um perfil de integração que parece ser mais seguro que do MoMLV. Porém, o impacto do vetor sobre o surgimento de efeitos adversos, como expansão clonal, é difícil de ser medido quantitativamente. Neste projeto, pretendemos elaborar uma nova metodologia que permitirá monitorar, de maneira simples e rápida, a clonalidade de populações celulares transduzidas com vetores retrovirais e lentivirais. Uma vez que o novo método seja validado, pretendemos empregá-lo para avaliar a influência do promotor viral e gene terapêutico contido no vetor retroviral e lentiviral sobre a tendência de expansão clonal num modelo de SCID-X1. A tecnologia também poderá ser utilizada para monitorar a clonalidade populacional de diferentes tipos celulares (célula tronco linhagem negativa, células Side Population) quando transduzidas sob uma variedade de condições (ativação com citocinas, tempo de ativação). (AU)