Estudo da modulacao do trocador na+/h+ apical, nhe3, pelo transporte de glicose em tubulos renais "in vivo" e em celulas renais em cultura

Resumo

Este projeto visa estudar a relação entre o permutador Na+/H+ expresso na membrana apical do túbulo proximal renal, isoforma 3, e o cotransportador Na+/glicose existente na mesma membrana, isoformas 1 e 2. Estudos anteriores referidos na literatura se interessaram por esta relação tendo em vista que ambos os mecanismos de transporte (de Na+ HCCV e de glicose e Na+) dependem, como fonte de energia, do gradiente de Na+ através da membrana apical deste segmento tubular gerado pelo transporte de Na+ pela membrana basolateral, especificamente através da atividade da Na+-K+ ATPase. Este projeto visa inicialmente estudar os mecanismos de modulação do transporte de H+ pelo NHE3 pelo transporte de glicose em túbulos renais e em células proximais em cultura a diferentes concentrações de glicose. Pretendemos investigar mecanismos de sinalização celular que podem definir a relação entre transporte de NHE3 e glicose em altas concentrações. Por fim, pretendemos estudar, utilizando técnicas de biologia molecular, qual é a relação/interação entre a modulação do NHE3 e a proteína SGLT1 na geração dos sinais intracelulares responsáveis pela regulação do transporte de H+. Estes objetivos serão concretizados por meio da medida de transporte de bicarbonato em túbulo proximal por micro perfusão estacionaria de túbulo proximal em várias condições experimentais, incluindo diabetes induzida por estreptozotoxina e tratamento com florizina, um inibidor da molécula SGLT; por isolamento de RNA (RT-PCR) e proteínas (Western-Blot) das moléculas responsáveis pela sinalização celular do processo investigado; e por análise do pH celular e o mecanismo de extrusão de H+ em células em cultura durante os processos de transporte ligados a NHE3 e SGLT1/SGLT2 nas condições experimentais investigadas. (AU)