"Purificação e caracterização bioquímica da hialuronidase presente na peçonha de Lachesis muta"

Resumo

O gênero Lachesis é composto pelas maiores espécies de serpentes peçonhentas brasileiras, que podem atingir, aproximadamente, 4 metros de comprimento. Essas serpentes são capazes de injetar na vítima, em apenas um bote, todo veneno que elas conseguem armazenar: aproximadamente 200 a 300 mg, sendo que alguns exemplares chegam a injetar até 500 mg (Cardoso et al., 2003). A peçonha de Lachesis apresenta atividades coagulante, hemorrágica e inflamatória aguda, podendo ainda levar a vítima ao óbito caso não seja rapidamente submetida a cuidados médicos.As enzimas hialuronidases presentes na peçonha de Lachesis são conhecidas como "fatores de espalhamento", pois destroem a rede de ácido hialurônico presente no tecido conjuntivo frouxo da vítima/presa, facilitando a permeação das toxinas. Entretanto, pouco se conhece a respeito dessas enzimas. Muitos estudos tem se preocupado no isolamento e caracterização de outras enzimas que compõem essa peçonha, tais como fosfolipases e metaloproteinases. Sendo assim, o presente estudo tem por objetivo a purificação da hialuronidase presente na peçonha de Lachesis muta, fazendo uso de técnicas como cromatografia líquida de alta eficiência, cromatografia de afinidade, entre outros procedimentos que se fizerem necessários, e a caracterização bioquímica da enzima purificada por eletroforese (determinação do peso molecular), focalização isoelétrica (ponto isoelétrico), seqüenciamento amino-terminal inicial e ensaios enzimáticos para a determinação de KM,Vmáx e especificidade da enzima para diferentes substratos.