Avaliação da fragmentação do DNA espermático em diferentes etapas da criopreservação

Resumo

As biotécnicas reprodutivas mais modernas, como a produção in vitro de embriões bovinos, tem sido cada vez mais aplicadas à produção animal para otimizar os cruzamentos direcionados e consequentemente melhorar o rebanho. Primar pela qualidade embrionária é a chave para o sucesso desta biotécnica. Para isto, deve-se atentar para todas as etapas do processo, desde a obtenção dos oócitos, a qualidade dos espermatozóides até o tipo de cultivo destes embriões e posterior inovulação dos mesmos. Evitar perdas embrionárias precoces é de extrema importância, considerando que os custos de produzir estes embriões são altos, bem como para evitar a perda do material genético superior. Para isto, a análise prévia da fragmentação do DNA espermático, ajuda a minimizar perdas econômicas, já que existe alta correlação entre esta análise e as perdas embrionárias precoces. No entanto, as técnicas utilizadas para a avaliação da fragmentação do DNA de espermatozóides bovinos são as mesmas utilizadas para o sêmen humano. Devido às diferenças morfológicas e moleculares entre as espécies, bem como a condição na qual normalmente se avalia este sêmen (fresco para humanos e criopreservado para bovinos), torna-se difícil avaliar até que ponto os resultados são fidedignos. Este trabalho tem como objetivo avaliar a fragmentação do DNA pelo método SCSA - Sperm Chromatin Structure Assay - em diferentes momentos da criopreservação do sêmen, correlacionando o grau de fragmentação do DNA com a integridade das membranas plasmática e acrossomal. E ainda avaliar a viabilidade das células espermáticas pelo potencial de mitocôndria e pelo grau de estresse oxidativo. Para isto, serão feitas 5 colheitas de sêmen de 6 touros da raça Holandesa. Cada amostra será dividida em 3 grupos experimentais: sêmen fresco, sêmen resfriado e sêmen congelado. Os 3 grupos serão avaliados quanto à fragmentação do DNA, integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial de mitocôndria e estresse oxidativo.