Determinação da mudança na composição da película adquirida sobre esmalte e dentina após exposição ácida: estudo proteômico

Resumo

O objetivo deste trabalho será analisar as mudanças no perfil proteico em películas adquiridas formadas in situ, em diferentes tempos, sobre o esmalte e sobre a dentina humana após a exposição a dois tipos de ácido: lático e cítrico. Serão utilizados 216 blocos de esmalte e 216 blocos de dentina humana (3X3 mm). Os experimentos serão realizados em quatro dias consecutivos. Em cada dia, os voluntários (n=9) utilizarão um dispositivo mandibular contendo 6 blocos de esmalte e 6 de dentina bovina. Após os voluntários permanecerem com o dispositivo na cavidade bucal por 10 ou 120 minutos para formação de película adquirida, os blocos serão imersos em ácido cítrico (1%, pH 2,5) por 1 min ou ácido lático (0,1 M pH 4,8) ou água deionizada por 30 min sob agitação a 37ºC. Na sequência, a película será removida com um papel de filtro umedecido em ácido cítrico a 3%. Este procedimento será repetido por mais dois dias adicionais e será feito um "pool' com os papeis de filtro obtidos dos 9 voluntários, para cada tipo de substrato, tempo de coleta e tipo de ácido. No quarto dia, os procedimentos serão repetidos, mas não será feito o "pool' das amostras dos diferentes voluntários, para uma tentativa de análise da variabilidade individual entre os voluntários. Após extração das proteínas, as mesmas serão submetidas a fracionamento por cromatografia de troca iônica. As frações coletadas serão concentradas e submetidas à cromatografia liquida de fase reversa interligada a um espectrômetro de massas (LC-ESI-MS/MS). Os dados obtidos de MS/MS serão processados e submetidos conjuntamente ao programa SQUEST (Bioworks Browser 3.2, Thermo-Finnigan, São Jose, CA, USA). As buscas serão feitas utilizando-se os bancos de dados SWISS-PROT e TrEMBL .