Análises da proteína anti-inflamatória galectina-1 nas células epiteliais pigmentadas da retina humana (ARPE-19) após ativação por endotoxina

Resumo

A inflamação é o principal fator contribuinte para inúmeras desordens oculares, podendo levar à diminuição da acuidade visual e, até mesmo à cegueira. Nos tratamentos das inflamações intra-oculares, em geral, são os glicocorticóides os medicamentos frequentemente administrados. No entanto, os efeitos colaterais desses fármacos, como a elevação da pressão intraocular, cataractogenese e potencial citotoxidade às estruturas da retina, limitam os seus usos. Devido a essas restrições, existe uma demanda óbvia para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. Entre os mediadores anti-inflamatórios, incluímos a proteína endógena galectina-1 (Gal-1) capaz de controlar o processo de transmigração e apoptose dos leucócitos, contribuindo para a homeostase da reação inflamatória. Contudo, a expressão da Gal-1 em tecidos oculares normais e inflamados tem sido pouco estudada. Por essas razões, o presente estudo tem como objetivo avaliar, in vitro, o efeito anti-inflamatório da administração da proteína Gal-1. Nós investigaremos a expressão e localização da Gal-1 endógena nas células ARPE-19 (derivada do epitélio pigmentado da retina humana normal) após ativação pelo lipopolissacarídeo bacteriano (LPS), e o possível efeito anti-inflamatório da administração da proteína nessas células. Inicialmente, as células ARPE-19 serão cultivadas em meio DMEM:F-12, na concentração de 104células/35mm por amostra, e subdivididas nos seguintes grupos: controle, ativadas pelo LPS e ativadas pelo LPS/tratadas com Gal-1 recombinante humana (hrGal-1; 0,04-4 mg/mL) ou dexametaxona (Dex; 1µM). Para determinar a especificidade do efeito da hrGal-1, serão adicionados em alguns poços açúcares Beta-galactose ou sucrose (100mM). As investigações serão realizadas nos tempos de 0, 2, 8, 24 e 48 horas. Nos grupos LPS, LPS/Gal-1 e LPS/Dex as células serão processadas para as análises da expressão da COX-2 pela reação de imunofluorescência. A proteína Gal-1 endógena será avaliada pelo método de Western blotting no grupo LPS e LPS/Dex. Os sobrenadantes, obtidos em todas as condições experimentais, serão coletados para as dosagens das citocinas pró-inflamatórias TNF-alfa, IL-6, IL-8, IL-10 e MCP1 pelo Sistema MAGPIX. As investigações serão realizadas tendo em vista as aplicações da proteína anti-inflamatória Gal-1 como uma alternativa terapêutica ocular.