Importância relativa da reatividade glial e da expressão de MHC Classe I na manutenção de circuitos neuronais in vitro

Resumo

Os astrócitos tornam-se reativos após lesão do tecido nervoso, seja por trauma ou estados patológicas. Paradoxalmente, essa resposta pode ser benéfica ou prejudicial à recuperação do Sistema Nervoso Central, o que depende de diferentes circunstâncias. No presente trabalho, investigaremos a possibilidade de manutenção dos efeitos pró-regenerativos de astrócitos cultivados in vitro, através da interferência de RNA (RNAi) para a proteína GFAP, bem como para a beta-2 microglobulina. Associado a essa técnica, procederemos ao tratamento de culturas e co-culturas (astrócitos e neurônios medulares) com uma citocina pró-inflamatória, o inteferon beta (IFN beta), recentemente demonstrado ser benéfico ao processo de regeneração nervosa. Tendo-se em vista que o aumento da produção de alguns fatores neurotróficos resulta na melhora da sobrevivência neuronal e atua sobre a plasticidade sináptica, investigaremos a expressão de BDNF e GDNF in vitro após silenciamento gênico e tratamento com IFN beta. Adicionalmente, será realizada imunocitoquímica e microscopia eletrônica de transmissão para avaliação da reatividade astrocitária (anti-GFAP e anti-S100 beta), da densidade de sinapses e da sobrevivência neuronal (anti-sinaptofisina e anti-NeuN, respectivamente). (AU)