Importância relativa da reatividade glial e da expressão de MHC classe I na manutenção de circuitos neuronais in vitro

Resumo

Os astrócitos tornam-se reativos após lesão do tecido nervoso seja por trauma ou doença. Paradoxalmente, essa resposta pode ser benéfica ou prejudicial à recuperação do Sistema Nervoso Central, o que depende de diferentes circunstâncias. No presente trabalho, investigaremos a possibilidade de manutenção dos efeitos pró-regenerativos de astrócitos cultivados in vitro, através da interferência de RNA (RNAi) para a proteína GFAP, bem como para a microglobulina beta-2. Associado a essa técnica, procederemos o tratamento de culturas e co-culturas (astrócitos e neurônios medulares) com uma citocina pró-inflamatória, o inteferon beta (IFN beta), recentemente demonstrado ser benéfico ao processo de regeneração nervosa. Adicionalmente, tendo-se em vista que o aumento da produção de alguns fatores neurotróficos resulta na melhora da sobrevivência neuronal, e também, atua sobre a plasticidade sináptica, investigaremos a expressão de BDNF e GDNF in vitro após silenciamento gênico e tratamento com IFN beta. Adicionalmente, será realizada imunocitoquímica com anticorpos que avaliarão a reatividade astrocitária (cabra anti-GFAP e coelho anti-S100 beta) e a quantidade de neurônios viáveis, bem como a densidade de sinapses funcionais (camundongo anti-NeuN e coelho anti-sinaptofisina, respectivamente).