Caracterização estrutural e análises funcionais do transportador de Nitrato/Nitrito do tipo ABC de Xanthomonas axonopodis pv. citri

Resumo

Xanthomonas citri é uma bactéria aeróbica, patógena, causadora do cancro cítrico, uma doença de citros que leva à perdas econômicas significativas no Brasil e no mundo. 4% do genoma desta bactéria corresponde à genes de transportadores do tipo ABC, uma das maiores famílias de proteínas, envolvidas com diferentes funções incluindo desde o transporte, nutrição, reparação de DNA até o fenômeno de resistência múltiplas à drogas. Dada a importância e envolvimento destes transportadores na fisiologia dos organismos, os mesmos podem ser usados como excelentes alvos para o desenvolvimento de inibidores do crescimento bacteriano. Apesar de sua importância, a relação destes transportadores com os mecanismos de infecção e patogênese em X. citri ainda não estão definidos. Neste contexto, este projeto visa caracterizar estrutural e funcionalmente os componentes do transportador do tipo ABC de nitrato/nitrito e taurina, codificado pelo operon nitTnrtBCD. Uma vez que o nitrato é a maior fonte de nitrogênio para organismos e que seu transporte é extremamente necessário, acreditamos que o transportador identificado tenha uma importância significativa para a bactéria. Estudos preliminares realizados com um mutante de X. citri portador de deleção no gene nitT, que codifica a proteína ligadora periplasmática, apontam um papel fundamental desta proteína no crescimento e infecção bacteriana. Pretende-se caracterizar estruturalmente todos os componentes deste transportador por espectroscopia, cristalografia e modelagem molecular, definindo as regiões de interação proteína-ligante e proteína-proteína, de forma a estabelecer possíveis alvos para o desenvolvimento de inibidores. Funcionalmente, as análises serão baseadas na construção de mutantes de deleção dos genes dos transportador e avaliação do comportamento dos mesmos em ensaios in vitro em diferentes condições de cultivo e in vivo, durante a infecção na planta.