Caracterizacao bioquimica e estrutural das interacoes da proteina rrp43 com outras subunidades do exossomos de levedura.

Resumo

Em arqueas e eucariotos, a degradação das moléculas de RNA na direção 3'→5' é dependente de um aparato molecular estruturalmente conservado, o exossomo. Segundo os modelos disponíveis, esse aparato é constituído por um anel hexamérico similar à RNase PH de bactérias, associado a um trímero com capacidade de se ligar a RNA. Enquanto o anel hexamérico catalisa a degradação de RNA em arqueas, nenhuma atividade nucleolítica foi observada para o correspondente eucariótico. Em eucariotos, o exossomo tem um número maior de subunidades e a sua atividade exonucleolítica 3'→5' é desempenhada por nucleases hidrolíticas que se associam fisicamente ao complexo formado pelo anel hexamérico e pelo trímero de ligação a RNA. Todavia, a montagem do núcleo cataliticamente inerte do exossomo parece ser de fundamental importância para a atividade desse complexo, já que mutações em regiões que provavelmente não interagem com RNA ou com as nucleases podem levar à inativação in vivo do exossomo. No laboratório da Profª. Carla Columbano de Oliveira, mutações como essas foram isoladas no gene que codifica a subunidade Rrp43 do anel hexamérico do exossomo de levedura. Com o objetivo de entender as causas da inativação do exossomo em linhagens mutantes nessa subunidade, o presente projeto visa à caracterização bioquímica e estrutural das interações de Rrp43 com outras subunidades do exossomo de levedura. Uma vez que o exossomo de levedura ainda não foi caracterizado estruturalmente, a obtenção das estruturas dos subcomplexos do exossomo será de fundamental importância para confirmar o modelo estrutural predito a partir de dados genéticos e bioquímicos e contribuirá para o entendimento do papel de subunidades do complexo na sua montagem, estabilização e atividade. (AU)