Identificação de genes regulados em resposta a carência de zinco em Caulobacter crescentus

Resumo

Em bactérias, o mecanismo mais comumente observado para solucionar o aparente paradoxo que surge entre a necessidade e toxicidade dos metais no metabolismo é a manutenção de genes envolvidos em captação, estocagem e efluxo destes metais. Na homeostase de zinco os mecanismos de captação, em geral, são regulados por um repressor transcricional, a proteína Zur, enquanto, genes codificantes para sistemas de efluxo são regulados por diversos ativadores transcricionais. Caulobacter crescentus, uma alfa-proteobactéria oligotrófica, possui em seu genoma um grande número de genes potencialmente envolvidos em captação e regulação da homeostase deste metal. Neste trabalho será realizada uma análise global dos genes diferencialmente expressos em resposta à limitação e excesso de zinco, através uma análise global de expressão por microarranjos de DNA. As fusões das sequências promotoras dirigindo a expressão do gene repórter lacZ serão utilizadas para a validação dos resultados obtidos via microarranjo de DNA, e para a determinação da presença de sítios de ligação da proteína Zur. A sequência consenso obtida será utilizada para uma busca in silico nas regiões intergênicas do genoma completo para encontrar novos promotores regulados por Zur que eventualmente não tenham sido identificados pelo ensaio de microarranjo de DNA. A validação destes sítios de ligação será realizada por técnicas bioquímicas in vitro e por análise da expressão destes genes numa linhagem mutante zur in vivo.