Avaliação da virulência e expressão gênica diferencial in vivo de Salmonella enterica mutantes para proteínas associadas ao nucleóide.

Resumo

Salmonella enterica é um bacilo Gram-negativo anaeróbico facultativo pertencente à família Enterobacteriaceae responsável por grandes perdas econômicas e sofrimento humano, podendo causar doenças ao homem, que variam de gastroenterites a infecções sistêmicas, e em animais, provocando grandes perdas econômicas. Há aproximadamente 20 anos atrás a sorovariedade Enteritidis se tornou a sorovariedade mais presente nos casos de salmonelose no Brasil, Europa e Estados Unidos, tendo como principal fonte da infecção ovos e outros produtos derivados do frango. Uma das formas de se controlar infecções por S. enterica é através do uso de vacinas, que já tem sido utilizada em diversos países, apesar de ainda haver necessidade de melhora destas. Dados recentes de nosso grupo indicam que mutantes nulos de S. enterica Typhimurium para genes codificadores de Naps (nucleoid-associated proteins), são atenuados quanto à virulência e capazes de induzir proteção no modelo murino de infecção. As patentes referentes ao desenvolvimento destas linhagens já foram ou estão sendo submetidas ao INPI. Baseados em dados recentes de nosso grupo com S. enterica Typhimurium, neste projeto propomos a construção de mutantes de S. enterica Enteritidis para os genes hupA e hupB, além do duplo-mutante hupAhupB, através do sistema de recombinação homóloga » Red, e a caracterização destes mutantes com relação a atenuação da virulência e da resposta imune gerada no modelo murino de infecção. Estes são genes histona-like que atuam de forma global na expressão gênica, portanto será feita uma análise das diferenças do perfil de expressão gênica dos mutantes novos de S. Enteritidis, assim como dos previamente construídos em S. Typhimurium, através da técnica de RNA-seq, e os dados serão validados por RT-PCR. Com isso esperamos obter dados importantes que evidenciem as diferenças genéticas entre as linhagens, e que reflitam na diferença entre seus mecanismos de patogenicidade.