Supraorganização cromatínica, conteúdo de DNA, concentração de glicoproteínas nucleares e avaliação imunofenotípica de células epiteliais límbicas expandidas sobre membrana amniótica intacta ou desepitelizada versus membrana de fucoidam-alginato-quitosana

Resumo

No final da década de 1990, o transplante de substratos colonizados por células tronco (CTs) epiteliais límbicas corneanas emergiu como uma opção terapêutica promissora para reconstruir a superfície ocular e restaurar a visão de pacientes com deficiência límbica. Transcorridos 15 anos de aplicação clínica, vários aspectos de segurança e de padronização das técnicas empregadas no manejo desses substratos ainda permanecem indeterminados. Não está totalmente esclarecido, por exemplo, se o substrato ideal para cultivar as CTs límbicas seria obtido a partir da membrana amniótica (MA) intacta ou desepitelizada. Também não é conhecido se membranas construídas com polissacarídeos, como o fucoidam, o alginato e a quitosana, usados na fabricação de curativos que estimulam a migração das células epiteliais epidérmicas e aceleram a reparação de feridas da pele, poderiam ser usadas para cultivar as células epiteliais límbicas e reparar as lesões da córnea. Muitos autores tentaram determinar o impacto da MA intacta e da MA desepitelizada sobre a expansão das CTs límbicas. Em adição, tendo em vista o uso crescente destas células, houve várias tentativas de ampliar a gama de substratos capazes de expandi-las. Porém, inadvertidamente, todas as pesquisas adotaram métodos de investigação repetidos para abordar estas questões multidisciplinares. Os estudos prévios focaram, apenas, na expressão diferencial das moléculas que marcam os estágios de diferenciação das CTs. Nenhum estudo avaliou a supraorganização e a expressão das macromoléculas nucleares que gerenciam as atividades biológicas das células epiteliais límbicas corneanas, em cultura. Sendo assim, a meta desta pesquisa é avaliar o estado funcional da cromatina, do DNA e das glicoproteínas nucleares das células epiteliais límbicas corneanas cultivadas sobre MA intacta, MA desepitelizada e membrana de fucoidam-alginato-quitosana.