Avaliação do potencial vacinal e caracterização bioquímica de termolisina de Leptospira interrogans

Resumo

A leptospirose é uma zoonose mundialmente disseminada que representa um grave problema de saúde pública. Microorganismos patogênicos, notadamente os que atingem a circulação sanguínea como a leptospira, desenvolveram múltiplas estratégias de evasão ao sistema imune do hospedeiro, em especial ao sistema complemento. Recentemente demonstramos que proteínas secretadas por espécies patogênicas de Leptospira são capazes de inibir as três vias de ativação do sistema complemento humano. Além disso, identificamos uma protease da classe das termolisinas como uma das proteínas responsáveis pelos efeitos observados no sobrenadante total. Considerando esta importante atividade biológica, acreditamos que seja de grande relevância avaliar o potencial vacinal desta termolisina, bem como efetuar a caracterização bioquímica da proteína, sendo estes os objetivos do Sub-projeto 1. Nos ensaios in vivo utilizaremos o modelo experimental de hamsters, os quais são susceptíveis à infecção por leptospiras. Os animais serão imunizados com a termolisina recombinante utilizando o hidróxido de alumínio como adjuvante. Os controles serão compostos por um grupo de hamsters imunizados com a vacina comercial (FarrowsureB, Pfizer) e outro com o veículo PBS e hidróxido de alumínio. Sangrias pelo plexo retro-orbital serão realizadas para acompanhamento do título de anticorpos anti-termolisina. Após as imunizações os animais serão desafiados com a estirpe virulenta L. interrogans sorovar Kennewiki. Os hamsters que sobreviverem à infecção serão sacrificados e os órgãos coletados para a realização de diferentes análises, tais como a histopatológica e a cultura de leptospiras. Já a caracterização bioquímica da termolisina será composta de ensaios de especificidade, cinética enzimática e prospecção de novos substratos. A análise do potencial vacinal e caracterização bioquímica de potenciais fatores de virulência são de grande importância, podendo contribuir para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas e/ou preventivas na leptospirose. Nosso grupo demonstrou anteriormente que a termolisina recombinante possui atividade proteolítica sobre a molécula de C3, representando um potencial candidato ao efeito observado no sobrenadante total das culturas. Desta forma, a identificação de quais moléculas do MAC (C5b-9n) são clivadas por esta metaloprotease ou por demais enzimas presentes no sobrenadante de culturas de leptospiras patogênicas bem como seu sítio de clivagem, são de grande importância. Assim, no Sub-projeto 2 avaliaremos se diversas estirpes de leptospira são capazes de secretar proteases que degradam as moléculas C5, C6, C7, C8 e C9. A habilidade de degradar moléculas do complemento pode contribuir para os processos de invasão e disseminação da bactéria no organismo. (AU)