Papel de modificadores de cromatina na dinâmica da transcrição de fatores de virulência no parasita da Malária Plasmodium falciparum

Resumo

Os parasitas da Malária expressam as proteínas que utilizam em cada fase do ciclo complexo de uma forma estritamente controlada dependendo das condições do ambiente onde e em qual hospedeiro se encontram. O controle de expressão ocorre predominantemente em nível de transcrição embora na hora da mudança de hospedeiro também existe controle pós-transcricional da disponibilização de transcritos para recrutamento aos ribossomos (P-bodies). O controle da transcrição é regido indiretamente por modificações dinâmicas da cromatina e a inibição de modificadores de cromatina pode levar a desequilíbrio e morte do parasita. Nesta proposta pretendemos focar no papel e na importância de modificadores de cromatina em parasitas da fase sanguínea na transcrição de genes variantes de Plasmodium falciparum, agente da mais perigosa forma da malária, também ainda existente no Brasil. No estudo anterior clonamos e produzimos linhagens de parasitas transgênicos que possibilitam o controle de expressão via ribozima de alguns modificadores de cromatina. Introduzindo ainda uma etiqueta hemaglutinina alteramos assim os supostos modificadores que são tanto histona deacetilases (SIR2A) quanto demetilases (Jumonji-like demetilase C1 e C2 e Lysine histona demetilase LSD-1). Modificamos também uma DNA Cytosin metiltransferase, uma Acetil histona transferase (SET2) e uma acetil-CoA sintetase que provavelmente fornece restos acetila para as Acetil-histona transferases. Ainda foram modificados três fatores de transcrição do grupo dos fatores de transcrição ApiAP2, dois dos quais provavelmente envolvidos no controle da transcrição de genes var, que codificam fatores de virulência por serem adesinas que podem desencadear formas graves da malária. Com estas linhagens, elucidaremos os sítios cromossómicos/genes em quais associam os fatores por ChIPseq. Ainda, procuramos também por fatores que interagem com as proteínas por imunoprecipitação e análise em espectrometria de massas de proteínas co-precipitadas. Ainda, analisamos o papel de prováveis (nc)RNAs no direcionamento de modificadores de cromatina no caso de expressão variegada como ocorre com genes var. Os resultados esperados devem contribuir para o entendimento da network de coordenação da transcrição em parasitas da malária da fase sanguínea e possíveis pontos de ataque para novos fármacos. (AU)