Estudo dos componentes estruturais da matriz do biofilme de Paracoccidioides Brasiliensis e sua interação com bactérias bucais

Resumo

Biofilmes são estruturas complexas e dinâmicas, formados por micro-organismos agregados e ligados a superfícies por meio, de uma matriz polimérica extracelular, proporcionando um ambiente estável protegido e associado a maior resistência aos antimicrobianos. Recentemente, a habilidade de formar biofilme foi identificada em Paracoccidioides brasiliensis tanto in vitro como in vivo. Este agente pode causar processos infecciosos em várias partes do corpo humano, como a cavidade bucal. As lesões bucais podem estar associadas a varias bactérias e a co-agregação de P. brasiliensis com essas bactérias ainda não foi demonstrado, mas potencialmente podem ocasionar processos mais dolorosos e difíceis de tratamento. Por outro lado, os princípios básicos da formação de biofilme e a compreensão molecular da formação e organização estrutural de biofilme de P. brasiliensis precisam ser mais bem conhecidos, visando melhores abordagens terapêuticas. Estudos relatam que existem alguns genes que podem ser mais expressos e importantes durante a produção da parede celular e a formação de biofilme. Assim, o estudo tem como objetivo caracterizar os elementos estruturais da matriz do biofilme de P. brasiliensis em monoespécie e avaliar sua expressão gênica por RT-PCR, bem como a interação de P. brasiliensis com as bactérias Streptococcus mutans e Staphylococcus aureus. As cepas de serão utilizadas para indução de biofilmes in vitro em microplacas. A viabilidade celular dos biofilmes será avaliada pelo ensaio de redução do sal de tetrazólio (XTT) e, a topografia e as microestruturas por microscopia eletrônica de varredura. Elementos estruturais da matriz como DNA, polissacarídeos, enzimas e proteínas serão marcados com fluorocromos, visualizados por microscopia de epifluorescência e quantificados por espectrometria de fluorescência molecular. Para determinação da biomassa formada pela interação de P. brasiliensis com S. mutans e S. aureus será utilizado o método de cristal violeta, sendo que o plaqueamento em agar permitirá determinar a contagem dos organismos viáveis. O estudo poderá contribuir com novos conhecimentos acerca da paracoccidioidomicose, doença que representa um importante problema de saúde pública no Brasil e na América Latina.