Desenvolvimento e avaliação de nanofibras e do carreador lipídico nanoestruturado associados à hesperitina como potencial terapêutico no reparo dos tecidos periodontais

Resumo

O desenvolvimento de membranas para regeneração óssea ou tecidual, com boas propriedades mecânicas, taxa de degradação previsível, baixo custo, e estrutura similar a matriz extracelular e de grande interesse para a área da nanobiotecnologia e engenharia tecidual. Dentro deste contexto, scaffolds de nanofibras apresentam características morfológicas capazes de promover maior interação célula/célula-matriz, como também a incorporação de moléculas bioativas, reforçando suas propriedades biológicas. Além disso, terapias alternativas associando produtos naturais e nanobiotecnologias também abrem novas perspectivas para liberação controlada de drogas. A hesperitina (HT - molécula bioativa) e um metabolito da hesperidina pertencente ao subgrupo das flavononas, encontrado principalmente em frutas cítricas, com propriedades terapêuticas eficazes como antioxidante, anti-inflamatória, anticancerígena, neuroprotetora, analgésica e efeitos benéficos sobre o metabolismo ósseo podendo assim, ser considerada como uma nova forma alternativa de prevenir e/ou tratar infecções. O objetivo do estudo 1 será desenvolver um scaffold de nanofibras associado a hesperitina com a finalidade de obter um material biocompatível e bioativo para aplicação na regeneração periodontal. Inicialmente, no objetivo 1, a ac'ao da hesperitina na expressão de mediadores inflamatórias, genes inflamatórios e vias de sinalização em cultura celular tipo macrófagos RAW 264.7 estimuladas por LPS serão avaliadas por Bioplex 200, RT-PCR e Luminex Multi- pathway Signaling Kit. Em sequência, no objetivo 2, a expressão de genes reguladores do metabolismo ósseo na osteogênese e osteoclastogênese serão avaliadas em células pré-osteoblásticas MC3T3-E1, e analisadas por PCR tempo real, formação de nódulos mineralizados, organização e maturação de colágeno, diferenciação de osteoclastos por imuno-histoquímica de TRAP e atividade de osteoclastos e pontos de reabsorção. No objetivo 3, serão confeccionados e caraterizados scaffolds de nanofibras de poli(ácido-L-lático) (PLLA) usando a técnica de electrospinning. Para avaliação da viabilidade, adesão e espalhamento celular sobre scaffolds de nanofibras serão utilizadas células pre-osteoblásticas MC3T3-E1. Por fim, no objetivo 4, a hesperitina sera adicionada aos scaffolds e a expressão de mediadores inflamatórias, bem como a diferenciação e atividade metabólica de osteoblastos e osteoclastos serão avaliados como descritos nos objetivos 1 e 2. O objetivo do estudo 2 será desenvolver um carreador lipídico nanoestruturado contendo hesperitina capaz de promover seu emprego para regeneração e tratamento da doença periodontal. Inicialmente, no objetivo 1, sistemas lipídicos nanoestruturados carregados com hesperitina (SLN-HT) serão sintetizados e caracterizados. Na sequência, no objetivo 2, linhagem celular de osteoblastos humanos serão tratadas com doses não citotóxicas de SLN-HT e seus efeitos sobre a osteogêneses serão determinados por meio da expressão de genes reguladores do metabolismo ósseo, formação de nódulos mineralizados, organização e maturação de colágeno. Por fim no objetivo 3, a ação do SLN-HT na expressão de mediadores inflamatórios e metaloproteinases de matriz, além do seu impacto sobre a vias de sinalização NF-kB será avaliada em monócitos/macrófagos humanos estimulados por Fusobacterium nucleatum. Os dados numéricos, obtidos pela aplicação dos protocolos laboratoriais, serão submetidos à análise estatística específica utilizando-se o software GraphPad Prism, e todos os testes desse estudo serão aplicados com nível de significância de 5 % (p<0.05). (AU)