Caracterização de linhagens de células de carrapatos e sua utilização como substrato para o crescimento, manutenção e perfil de expressão proteica de Anaplasma marginale

Resumo

Os carrapatos são artrópodes de grande importância médica e veterinária, com muitas espécies responsáveis pela transmissão de vírus, bactérias e protozoários aos seus hospedeiros. Alguns dos patógenos transmitidos por carrapatos são difíceis de serem cultivados in vitro, e, não crescem em meios artificiais. Cultura de células de carrapatos tem representado uma excelente ferramenta para isolar e estudar patógenos, permitindo a produção de material antigênico para testes diagnósticos, produção de anticorpos e vacinas, e para estudos das relações entre hospedeiro-vetor-patógenos. Nesse sentido, esse estudo tem por objetivo caracterizar linhagens de células de carrapatos e utilizá-las como substrato para o crescimento, manutenção e perfil de expressão proteica de Anaplasma marginale. Para tanto, utilizaremos culturas primárias e linhagens estabelecidas de células de carrapatos provenientes de ovos de Amblyomma sculptum (Berlese) e Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini). As culturas primárias serão preparadas com massas de ovos e mantidas à 30 C° em meio L-15B (Leibovitz) suplementado com Soro Fetal Bovino, subcultivadas ao atingirem a confluência necessária e criopreservadas em diversas passagens. Para a caracterização das células em cultivo, séra realizada a caracterização morfológica com técnicas histológicas e cariotipagem. As células inoculadas com Anaplasma marginale canis serão analisadas por preparações em lâminas e contagens de células infectadas em microscopia óptica, pela PCR em tempo real e por Microscopia Eletrônica de Transmissão. Além disso, será realizada a análise proteômica diferencial das células infectadas e não infectadas, visando a busca de proteínas que poderão ser utilizadas como antígenos vacinais no futuro.