Pacientes com lúpus e obesidade apresentam alteração do perfil de metilação dos genes inflamatórios? Estudo transversal

Resumo

O Lúpus eritematoso sistêmico (LES) tem sido relacionado a uma série de desbalanços de grande complexidade, uma vez que, são atribuídos tanto a fatores ambientais, quanto a fatores genéticos e epigenéticos. Desta forma, a melhor compreensão destas alterações epigenéticas contribui para o manejo e tratamento multidisciplinar adequado, visando a atenuação da fisiopatologia. Pontualmente, sabe-se que a associação da obesidade e LES são de caráter desconhecido, logo, que o conhecimento das alterações epigenéticas entre essas patologias são escassos. O estudo transversal tem como objetivo avaliar se existe um perfil epigenético específico e diferente em pacientes com LES obesos e com peso normal e se a suplementação com ácido fólico e vitamina B12 é capaz de modular alterações epigenéticas no sangue e tecido adiposo de pacientes com LES obesos e com peso normal. 48 pacientes do sexo feminino, no período pré-menopausa, com idade entre 18 a 40 anos, com pontuação SLEDAI d 4 no Índice de Atividade de Doença de Lúpus Eritematoso Sistêmico 2000 (SLEDAI-2K), sob tratamento com glicocortóide em uma dosagem <10 mg / d, e sob tratamento com cloroquina em dose estável serão selecionados e submetidos a protocolo de suplementação de ácido fólico e vitamina B12 por 3 meses. Os pacientes serão avaliados antes e após a suplementação. Serão avaliados parâmetros clínicos (duração da doença, dose atual e cumulativa de prednisona) por meio da revisão de registros médicos e entrevistas com pacientes. Serão realizadas avaliação antropométrica (peso, estatura, índice de massa corporal) e de composição corporal (massa magra e massa gorda), avaliação da ingestão alimentar (por recordatórios alimentares de 24 horas) e avaliação bioquímica (glicemia, lipidograma, proteína C reativa, vitamina B12, ácido fólico, leptina, adiponectina e citocinas). Para análise epigenética (metilação do DNA, hidroximetilação e microRNA) e de expressão gênica serão coletados 2g de tecido adiposo subcutâneo abdominal por biópsia na mesma região acima da cicatriz umbilical superior direita do paciente. Para a análise de metilação do DNA, um total de 4 ¼L de DNA tratado será usado para hibridização na plataforma Infinium Human Methylation EPIC Beadchip. A análise da expressão gênica será realizada em triplicata por qPCR utilizando o 7500 Fast Real PCR System (Applied Biosystems). Os genes alvo são: IL-2, IL-17A, STAT3, CREM2, DMNT1 e DMNT3. Será avaliada a expressão dos seguintes microRNA: miR-21, miR-126, miR-132, miR-145, miR-146 e miR-181. Nas análises estatísticas serão utilizados os testes de Shapiro-Wilk, teste t independente teste U de Mann-Whitney, ANOVA de medidas repetidas e/ou testes de Wilcoxon. As interações serão inferidas por meio de regressões lineares e correlação de Pearson ou Spearman. A análise dos dados será realizada por meio do Statistical Package for Social Science (SPSS versão 22.0 Inc. Chicago. IL). O nível de significância será estabelecido em p d 0,05.