Analisando o perfil epigenético das células T CD8+ infiltrantes de tumor para superar o meio imunossupressor dos nichos hipóxicos tumorais

Resumo

Entre as características que caracterizam o microambiente tumoral (TME), a falta de oxigênio, denominada hipóxia, constitui uma marca registrada da maioria dos tipos de câncer. Ela está ligada à imunossupressão e associada à desregulação da maquinaria epigenética celular. Curiosamente, o status de diferenciação e funcionalidade das células T CD8+ são definidos por seus programas epigenéticos. Uma vez que a ausência de células T citotóxicas infiltrantes do tumor está relacionada a uma parte importante da falha na resposta à imunoterapia, nosso objetivo é focar nos padrões de metilação do DNA influenciados pelo oxigênio que afetam a infiltração e ativação das células T CD8+ nos nichos tumorais. Para interrogar estas alterações epigenéticas, foi projetada uma biblioteca CRISPR/Cas9 contendo um RNA guia, visando os genes associados à (des)metilação do DNA. As células OT-I T serão transduzidas com esta biblioteca epigenética de gRNA lentiviral, transferidas para ratos receptores e classificadas a partir dos tumores. Seu DNA genômico será analisado por sequenciamento de nova geração. Será feita a distinção entre (1) células T capazes de infiltrar regiões hipóxicas vs. células T residentes nas áreas normóxicas, e (2) células T CD8+ citolíticas vs. disfuncionais. Desta forma, será possível identificar os genes relacionados à (des)metilação do DNA cuja deleção favorece o acúmulo de células T CD8+ com retenção de funcionalidade nos nichos hipóxicos de tumores. O estudo da ligação entre a assinatura de metilação do DNA das células T citotóxicas e sua capacidade de infiltração no tumor revelará uma lista de vias e genes que são causadores de uma aptidão ineficiente das células T dentro do TME (hipóxico). Estes resultados abrirão oportunidades para linhas de pesquisa que investigarão intervenções terapêuticas baseadas nos genes expostos. Eles também fornecerão possíveis assinaturas prognósticas e preditivas a serem validadas em estudos prospectivos. (AU)