Engenharia de película adquirida com uma nova cistatina derivada da "Maqui Berry" (Aristotelia chilensis - MaquiCPI-3): Definindo concentrações para a prevenção da erosão do esmalte e da dentina in vitro

Resumo

A incorporação de proteínas (por exemplo, CaneCPI-5) na película adquirida (PA) tem favorecido a sua habilidade em proteger contra a erosão. Neste contexto, uma nova proteína inibidora de cisteíno-proteases (cistatina) derivada da "Maqui Berry" (MaquiCPI-3) merece ser estuda, devido a algumas características semelhantes à CaneCPI-5 e seu alto rendimento quando expressa de forma heteróloga em bactérias. Os resultados iniciais in vitro com a MaquiCPI-3 poderão abrir uma nova possibilidade preventiva contra a erosão dentária, objetivando a sua incorporação em produtos odontológicos para aumentar a capacidade ácido-resistente da PA (Engenharia de PA). Assim, o objetivo do presente estudo será analisar o efeito protetor e definir concentrações da MaquiCPI-3 pela modificação da PA para proteção contra a erosão inicial do esmalte e da dentina in vitro. Serão confeccionadas 238 amostras (4 X 4 mm), sendo de 119 esmalte bovino e 119 de dentina bovina. Posteriormente, as amostras serão aleatorizadas e divididas em 7 grupos, de acordo com os tratamentos (n/grupo=17): Água deionizada (controle negativo); CaneCPI-5 0,1 mg/mL (controle positivo); Solução comercial com SnCl2/NaF/AmF (800 ppm Sn+2.500 ppm F-, pH 4,5, Erosion Protection® - GABA, (controle positivo)); MaquiCPI-3 0,1 mg/mL; MaquiCPI-3 0,5 mg/mL; MaquiCPI-3 1,0 mg/mL e MaquiCPI-3 2,0 mg/mL. Inicialmente, as amostras serão tratadas individualmente (250 µL) com as respectivas soluções por 2h, 30ºC, sob agitação constante. Em seguida, a PA será formada individualmente (250 µL) por 2h, 30ºC, sob agitação constante (a saliva estimulada será coletada de 3 voluntários). Posteriormente, o desafio erosivo será feito individualmente (1 mL) com ácido cítrico 0,65% (pH = 3,4) por 1 min, a 37ºC, sob agitação constante. Estes procedimentos serão realizados uma vez ao dia, durante 3 dias consecutivos. As análises de microdureza de superfície (SHM) serão executadas e as alterações na SMH (SHM baseline - SMH pós-erosão) serão calculadas. Os dados serão analisados, utilizando-se o software GraphPad Prism. Primeiro, os dados serão checados em relação à normalidade (teste de Kolmogorov-Smirnov) e homogeneidade (teste de Bartlett), para seleção do teste estatístico apropriado. O nível de significância será de 5%.