Estudos funcionais e estruturais da proteína ortóloga a PinX1 e sua influência nos telômeros de Leishmania spp

Resumo

Leishmanioses são um conjunto de doenças que se manifestam de diferentes formas podendo causar a forma tegumentar (cutânea), a mucocutânea e a visceral (calazar). São causadas por protozoários do gênero Leishmania transmitidos pela picada de insetos flebotomíneos. Os tratamentos disponíveis possuem baixa eficácia, alta toxicidade e custo financeiro elevado, podendo levar à resistência dos parasitos, o que justifica a busca por novos medicamentos e alvos terapêuticos. Os telômeros de Leishmania são alvos em potencial para o desenvolvimento de novos fármacos e entender a biologia desta estrutura se faz necessário. Os telômeros são os terminais físicos dos cromossomos lineares e estão diretamente implicados com a manutenção e estabilidade do genoma, pois impedem degradação de fusões terminais que são eventos deletérios a homeostase celular. Os telômeros do parasito e da maioria dos eucariotos, são mantidos por ação da telomerase, cuja atuação também é regulada por proteínas associadas ao complexo e por proteínas teloméricas que tornam a sua atividade mais efetiva e estável. Até o momento, o complexo telomérico de Leishmania amazonensis é o melhor caracterizado dentre os tripanosomatídeos, porém pouco se sabe sobre a biogênese e a composição exata deste complexo. Resultados preliminares do nosso grupo indicam que no genoma de Leishmania spp. existe um ortólogo para uma dessas proteínas regulatórias, a proteína PinX1, considerada uma proteína acessória do complexo ribonucleoproteico da telomerase. Em eucariotos modelo, a PinX1 atua como inibidor natural da atividade enzimática sequestrando o componente TERT do complexo telomerase RNP. A proteína ortóloga a PinX1 em Leishmania apresenta o domínio N-terminal conservado rico em glicinas (G-patch) e um domínio C-terminal de interação com a telomerase (TID, Telomerase Inhibitory Domain) e com a proteína TRF1 de mamíferos, menos conservado. Nosso objetivo é realizar testes biofísicos buscando elucidar a estrutura de PinX1 de Leishmania spp. e como ela interage com os componentes TERT e o TER do complexo telomerase, bem como iniciar estudos funcionais obtendo linhagens superexpressoras e nocaute para PinX1. (AU)