Avaliação da expressão global de mirnas em tecido adiposo branco em ratos adultos, proles de ratas com doença periodontal

Resumo

A hipótese da programação fetal sugere que estímulos ou agressões durante a vida intrauterina podem resultar em alterações permanentes na fisiologia e metabolismo da descendência, aumentando o risco de doenças na vida adulta. As alterações nos padrões de expressão de miRNAs são consideradas mecanismos moleculares responsáveis por esta programação. Estudos anteriores demonstraram que a doença periodontal (DP) materna promove resistência insulínica, aumento nas concentrações plasmáticas de citocinas, redução do conteúdo de GLUT4, do seu índice de translocação para membrana plasmática e sua expressão em sua prole adulta. Ademais, a doença periodontal materna foi capaz de ativar vias inflamatórias no tecido muscular esquelético da prole adulta, esta ativação foi comprovada pelo aumento da expressão de TNF-±, NF-kBp65, NF-kBp50, IKKa/b e ERK1/2. Porém não houve nenhuma alteração na metilação de DNA do gene do GLUT4 e na expressão de JNK na prole adulta. Por meio destes resultados, foi possível inferir que um dos motivos para a redução da expressão de GLUT4 no tecido muscular de ratos adultos proles de ratas com DP deu-se por meio da ativação de vias inflamatórias. Ademais, de acordo com o projeto de pós-doutorado da coorientadora Maria Sara foram modulados 11 miRNAs em ratos adultos proles de ratas com doença periodontal (fold change ± 1,5; p <0,05) quando comparados com ratos controle em tecido muscular esquelético. Dentre estes 5 miRNAs foram upregulated (miR-3556b; miR-3544; miR-181d; miR-223-3p; miR-211-3p) e 6 downregulated (miR-126a-3p; miR-101a-3p; miR-499b-5; miR-146-5p; miR-182; miR-465-5p) (dados não publicados). Tais achados evidenciam a necessidade de realizar mais estudos para verificar se outro tecido, como tecido adiposo, apresenta alterações na expressão global de microRNA na prole adulta. Portanto, os objetivos do presente estudo serão avaliar em ratos adultos, proles de ratas com doença periodontal: a) analisar a expressão global de miRNAs em tecido adiposo branco periepididimal (TAB); b) Western Blotting para validação das vias que os miRNAs atuam. As ratas serão divididas em dois grupos: 1) com doença periodontal (DP), no qual esta doença será induzida por meio de ligadura com fio de seda ao redor do 1º molar inferior; 2) ratas controle (CN). Após 7 dias da colocação da ligadura, as ratas de ambos os grupos serão colocadas para acasalamento, verificando-se diariamente, por esfregaço vaginal, o dia da copulação. Quando os filhotes machos destas ratas completarem 75 dias, realizar-se-ão os experimentos: análise da expressão global de miRNAs (pela técnica de microarranjo) em TAB.