Atividade peroxidática de citocromos sobre hidroperóxidos, compostos carbonílicos, bases de Schiff e lipídios de membrana: produção de espécies excitadas e radicais livres

Resumo

Além de seu papel como transportador de elétrons na cadeia respiratória, o citocromo c também exibe atividade peroxidase/oxidase sobre vários substratos, tais como: aldeídos, B-dicetonas, hidroperóxidos, bases de Schiff etc. Temos demonstrado que a atividade peroxidática de citocromo c sobre aldeídos, beta-dicetonas e hidroperóxidos é fortemente influenciada pela sua associação a interfaces carregadas. Essa associação induz mudanças conformacionais no grupo heme e na apoproteína que favorecem sua atividade catalítica. Nesse sentido, a perda da sexta posição de coordenação do ferro hemínico com a metionina 80 é crucial para otimizar esta atividade e pode ser induzida pela associação com interfaces carregadas negativamente ou mesmo por alguns substratos. A oxidação desses substratos por citocromo c gera espécies radicalares intermediárias, produtos no estado excitado triplete e oxigênio singlete, espécies estas conhecidas por causar danos oxidativos em estruturas celulares. A participação de citocromo c no fenômeno de apoptose e a possível relação com sua atividade peroxidática ampliam a importância do estudo dessa proteína como peroxidase/ oxidase. Neste projeto, objetiva-se dar continuidade aos nossos estudos sobre a atividade peroxidática de citocromo c frente a determinados substratos já estudados como aldeídos, B-dicetonas, hidroperóxidos e estender a novos substratos como bases de Schiff e lipídios de membrana. Abordará a relação dessa atividade com a associação a membranas, bem como a caracterização das espécies radicalares intermediárias e das espécies excitadas geradas como produto final das reações. O estudo da atividade peroxidática de citocromo c também envolverá o desenvolvimento de biossensores e a caracterização dessa atividade peroxidática quanto a parâmetros cinéticos. Além de produtores de espécies pró-oxidantes, os citocromos serão também estudados como alvo das mesmas, nesse sentido será investigada a relação entre as alterações produzidas nos citocromos e sua participação no fenômeno de apoptose. Futuramente, os estudos serão estendidos a citocromo c modificado quimicamente e modificado por mutações sítio-dirigidas, bem como a outros citocromos respiratórios, especialmente citocromo c-oxidase. (AU)