| Texto completo | |
| Autor(es): |
Marcondes, M. F. M.
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Alves, F. M.
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Assis, D. M.
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Hirata, I. Y.
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Juliano, L.
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Oliveira, V.
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Juliano, M. A.
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Número total de Autores: 7
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| Afiliação do(s) autor(es): | [1] Univ Fed Sao Paulo, Escola Paulista Med, Dept Biophys, Sao Paulo - Brazil
Número total de Afiliações: 1
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| Tipo de documento: | Artigo Científico |
| Fonte: | FEBS OPEN BIO; v. 5, p. 429-436, 2015. |
| Citações Web of Science: | 1 |
| Resumo | |
The substrate specificity of recombinant human mitochondrial intermediate peptidase (hMIP) using a synthetic support-bound FRET peptide library is presented. The collected fluorescent beads, which contained the hydrolysed peptides generated by hMIP, were sequenced by Edman degradation. The results showed that this peptidase presents a remarkable preference for polar uncharged residues at P-1 and P-1' substrate positions: Ser = Gln > Thr at P-1 and Ser > Thr at P-1'. Non-polar residues were frequent at the substrate P-3, P-2, P-2' and P-3' positions. Analysis of the predicted MIP processing sites in imported mitochondrial matrix proteins shows these cleavages indeed occur between polar uncharged residues. Previous analysis of these processing sites indicated the importance of positions far from the MIP cleavage site, namely the presence of a hydrophobic residue (Phe or Leu) at P-8 and a polar uncharged residue (Ser or Thr) at P-5. To evaluate this, additional kinetic analyses were carried out, using fluorogenic substrates synthesized based on the processing sites attributed to MIP. The results described here underscore the importance of the P-1 and P-1' substrate positions for the hydrolytic activity of hMIP. The information presented in this work will help in the design of new substrate-based inhibitors for this peptidase. (C) 2015 The Authors. Published by Elsevier B.V. on behalf of the Federation of European Biochemical Societies. This is an open access article under the CC BY-NC-ND license. (AU) | |
| Processo FAPESP: | 12/50191-4 - Síntese, estudo cinético e aplicações de substratos e inibidores de enzimas proteolíticas |
| Beneficiário: | Maria Aparecida Juliano |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Temático |
| Processo FAPESP: | 11/51718-3 - Incorporação sítio específica de aminoácidos não naturais para o estudo de mudanças conformacionais em proteínas |
| Beneficiário: | Vitor Marcelo Silveira Bueno Brandão de Oliveira |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Regular |
| Processo FAPESP: | 11/20941-9 - Desenvolvimento e utilização de técnicas de fluorescência para o estudo de alterações conformacionais em proteínas |
| Beneficiário: | Marcelo Ferreira Marcondes Machado |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado |
| Processo FAPESP: | 14/00661-0 - Desenvolvimento e utilização de técnicas de fluorescência para o estudo de alterações conformacionais em proteínas |
| Beneficiário: | Marcelo Ferreira Marcondes Machado |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado |